成肌细胞-PLGA支架复合物修复比格犬半月板局部缺损的实验研究

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  目的:以经体外扩增及细胞因子诱导后已进入软骨细胞分化谱系的比格犬成肌细胞为种子细胞,与聚乳酸聚乙酸共聚物(poly-lactide-co-glycolide,PLGA)支架复合,以细胞-PLGA支架复合物的形式植入比格犬体内半月板缺损处,探讨用组织工程学原理和方法重建半月板结构及功能的可行性.方法:取成年比格犬大腿股直肌肌肉,采用机械分解法与Ⅳ型胶原酶和胰蛋白酶的二步酶消化法相结合分离获取犬成肌细胞,收集后以5.0×106细胞/cm3材料体积密度将细胞接种于PLGA支架中,以含50ng/ml软骨源性形态发生蛋白-2和20 ng/ml转化生长因子β1软骨诱导培养基培养14d.然后分别将诱导组和对照组细胞-PLGA支架复合体植入24只比格犬半月板缺损出,分别在术后4周、8周和12周后取出半月板修复组织行大体观察、HE染色,Ⅰ型胶原与S100蛋白的免疫组织化学染色,蛋白印迹试验(Westernblot)检测修复组织中Ⅰ型胶原蛋白的表达情况,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测修复组织中Ⅰ型胶原蛋白含量,并检测各组修复组织的GAG含量及压缩弹性模量.
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