【摘 要】
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本研究采用低致病力禽流感病毒(LPAIV)H9N2亚型A/Chicken/Shanghai/10/99(SH/10/99)和A/CK/Guangxi/10/99(GX/10/99)毒株作为免疫原,免疫8周龄BALB/C小鼠,用血凝抑制试验(HI)方法筛选和有限稀释法克隆纯化,最后获得十株H9亚型HA特异性单抗细胞株:其中SH/10/99作为免疫原的有四株:A3、B/D12、A11/C6、A/B3;
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;江西农业大学,江西,南昌,330045
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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本研究采用低致病力禽流感病毒(LPAIV)H9N2亚型A/Chicken/Shanghai/10/99(SH/10/99)和A/CK/Guangxi/10/99(GX/10/99)毒株作为免疫原,免疫8周龄BALB/C小鼠,用血凝抑制试验(HI)方法筛选和有限稀释法克隆纯化,最后获得十株H9亚型HA特异性单抗细胞株:其中SH/10/99作为免疫原的有四株:A3、B/D12、A11/C6、A/B3;GX/10/99作为免疫原的有六株:C/D4、D/G7、C/C10、B/E9、C/E2、E/B11.10株具有HI活性的H9亚型特异性McAbs与其他H9亚型AIV分离株的交叉反应实验表明,A/B3、B/D12、C/D4、D/G7这四株单抗对所选择的毒株具有较好的HI活性,A/CK/Heilongjiang/35/00病毒不与任何一株单抗发生血凝抑制反应.A/B3、B/D12、C/D4进行病毒的中和实验结果表明,抗体的中和活性与其血凝抑制活性之间存在很大的相关性,且基本上是一致的,且能对鸡胚提供很好的保护.所以这些单克隆抗体将在禽流感的预警预报工作以及H9亚型流感病毒HA基因的结构和功能的研究中发挥重要的作用。
其他文献
为了研究鸡包涵体肝炎过程中单核巨噬细胞分子免疫机理.本研究采用200只1日龄SPF雏鸡,2日龄时接种FAV-8型禽腺病毒100只,分别在1,3,5,7,9,12,15,20,25,30日龄时,取攻毒组和对照组各10只,心脏采血致死,制备血液、脾脏白细胞悬浮液,用流式细胞仪检测血液和脾脏中单核巨噬细胞的变化,血液中单核细胞的凋亡规律.结果显示:脾脏Ia+Mφ只在攻毒后第25d有显著提高,第1、5到7
本研究以传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株(野毒株)基因组为模板,用蛋白酶K法提取病毒基因组核酸dsRNA,在cDNA克隆的5端上游引入了T7启动子序列,采用Long-accurateRT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了病毒基因组A节段与B节段全长cDNA.序列测定结果表明,基因组A节段全长共3267个核苷酸,包括5,,3,端的非编码区和两个部分重叠的开放阅读框,,基因组B节段全长共2843
目前对新城疫(Newcastledisease,ND)致病性的检测常用的方法为体外试验,需要测定三个致病指数,即最小致死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI),6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI).本试验对2株新城疫病毒分别用普通鸡和鸡胚和SPF鸡和鸡胚来测定这三个致病指数,结果显示,在此试验中不能用普通鸡和鸡胚来代替SPF鸡和鸡胚,母源抗体对MDT和ICPI的测定
利用PCR(PolymeraseChainReaction)技术扩增出IBDV的结构蛋白基因VP3,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确.SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白基因VP3,约33ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9％,
针对新城疫病毒(NDV)F基因保守区内的核苷酸序列设计1对引物,用此对引物和标准NDV毒株(含NDV强毒和弱毒)的RNA为模板,建立并优化SYBRGreenⅠ模式荧光RT-PCRNDV检测方法.待测样品扩增产物的Tm值和阳性对照的Tm值相差在2℃范围之内判为阳性.此法比文献报道的普通RT-PCR法更敏感,但是仍低于鸡胚接种分离病毒法。
根据新城疫病毒(NDV)融合蛋白和禽流感病毒(AIV)核蛋白的核酸序列设计两对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156bp和219bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT-PCR方法.试验中未能检出弱毒力NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性.经验证,复合引物与单一引物的扩增
将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1.在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1.rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAGE、Western
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别.该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的
基于目前已知禽流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及H5N1、H9N2亚型禽流感病毒.从核酸提取、基因扩增到产物分析在3-4小时内完成.采用所建立的RT-PCR和多重RT-PCR,分析36株禽流感及相关病毒分离物,其结果与传统病毒分离鉴定完
以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得2株能稳定分泌抗血凝素特异性HI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4CB、BBA.两株杂交瘤细胞株产生的小鼠腹水和细胞培养液上清的