微小RNA-320d在人弥漫大B细胞瘤中对靶基因CDK6调控作用的研究

来源 :第九届中国肿瘤学术大会暨第十五届海峡两岸肿瘤学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dabingjiajia
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  目的探讨CDK6的表达与弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)临床病理特征间的关系,验证miR-320d靶向调控CDK6对DLBCL细胞增殖的影响。方法收集山西省肿瘤医院病理科有随访资料的DLBCL石蜡样本84例,应用免疫组化EnVision法对所有样本进行CDK6免疫标记;利用生物信息学预测软件对miR-320d特异性结合的靶基因进行预测,将候选靶基因CDK6的3UTR融合到荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因测定试剂法检测酶活性,检测miR-320d对靶基因CDK6的3UTR的调控作用;构建miR-320d过表达和CDK6-shRNA的慢病毒载体,并选择成熟miRNA的慢病毒载体转染DLBCL细胞株;CCK-8法和AnnexinV-APC/7-AAD法检测miR-320d稳定过表达和干扰CDK6对DLBCL细胞增殖和凋亡的影响;提取DLBCL细胞、miR-320d稳定过表达及对照组细胞的总蛋白,用Westernblotting技术检测CDK6蛋白表达水平。
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