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目的如何利用肌球蛋白ATP酶染色法(包括酸性、碱性预孵)、琥珀酸脱氢酶(SDH酶)染色法及免疫组织化学法测定骨骼肌肌纤维类型;以大鼠咬肌为例分述并比较上述染色法的特点与相关性及选用;不同染色法对大鼠咬肌各型肌纤维的区分和对比。方法 8周龄SD雄性大鼠20只,3%戊巴比妥钠腹腔注射,麻醉下经升主动脉快速灌注0.9%生理盐水,制备双侧咬肌组织块。行酶组织化学染色标本直接置入液氮速冻,或立即进行恒冷箱(-20℃)切片;行免疫组化染色的标本置入4%多聚甲醛固定72小时,梯度蔗糖BP液脱水。切片分别行下述染色法:酸性和碱性预孵的肌球蛋白ATP酶染色法,检测Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型肌纤维在咬肌内的分布和构成;SDH酶染色法,可将肌纤维分为SO、FG和FOG三型;免疫组化SABC法,检测咬肌肌纤维MyHC-Ⅰ和MyHC-Ⅱ异构型的表达、定位及空间分布。应用图象分析仪摄像和并对数据进行分析和量化处理。结果 (1)肌球蛋白ATP酶染色法:ATP酶碱法(PH10.4)染色,可将咬肌肌纤维可分为Ⅰ型、Ⅱ型,Ⅰ型肌纤维较细,染色浅;Ⅱ型肌纤维较粗,染色深。此法不能明确界定ⅡA和ⅡB型纤维。咬肌含大量Ⅱ型纤维,约占80%,Ⅰ型纤维主要分布在咬肌深部。与此相反,ATP酶酸法(pH 4.4)染色,Ⅰ型肌纤维被染成深褐色,Ⅱ型肌纤维则着色较浅。Ⅱ型纤维可进一步区分为亮色的ⅡA型和暗褐色的ⅡB型。咬肌Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型纤维的比例分别约为18%、50%和32%。ATP酶酸、减法所显示的Ⅰ型与Ⅱ型纤维基本吻合。(2)SDH酶染色:肌纤维呈蔚蓝色,可分为浅染FG(相对应ⅡB型)、中染SO(相对应Ⅰ型)和深染FOG(相对应ⅡA)三型。大鼠咬肌SO、FOG·及FG型的比例依次约为20%、47%、20%和33%。ATP酶和SDH酶染色在区分Ⅰ型纤维上基本吻合。(3)免疫组化染色:大鼠咬肌90%以上为MyHC-Ⅱ型肌纤维,仅在咬肌深部有少量MyHC-I型肌纤维。结论肌球蛋白ATP酶酸、碱法及SDH酶染色法三者之间在大鼠咬肌肌纤维分型上有相对的一致性,酶组织化学染色法与免疫组织化学染色法对肌纤维型的区分有所差异。ATP酶活性可反映肌纤维收缩特性,SDH酶活性主要反映肌纤维的代谢特征。免疫组化学法可检测肌纤维MyHC构型特征,从蛋白分子结构区分纤维类型,鉴定肌纤维收缩特性。上述染色法值得在骨骼肌相关研究中借鉴选用。关键词:肌纤维型;肌球蛋白ATP酶染色法,SDH酶染色法,免疫组织化学染色法,MyHC异构型,咬肌,大鼠