【摘 要】
：
利用PCR和基因定点突变技术,从大肠杆菌C83902的质粒中扩增出K88ac基因、ST1突变基因和LTB基因,通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切、连接和转化,构建了含K88ac-ST1-LTB融合基因表达载体的重组菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5).经酶切鉴定和DNA序列分析证实,构建的重组质粒pXK88acST3LT5中含有K88ac-ST1-LTB融合基因,且基因序列和阅读
【机 构】
：
中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃,兰州,730000 大连大学生物工程学院,辽宁,大连,1160
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
论文部分内容阅读
利用PCR和基因定点突变技术,从大肠杆菌C83902的质粒中扩增出K88ac基因、ST1突变基因和LTB基因,通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切、连接和转化,构建了含K88ac-ST1-LTB融合基因表达载体的重组菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5).经酶切鉴定和DNA序列分析证实,构建的重组质粒pXK88acST3LT5中含有K88ac-ST1-LTB融合基因,且基因序列和阅读框架均正确.经ELISA检测,重组菌株表达的K88ac-ST1-LTB融合蛋白能够被ST1单抗、LTB和K88ac抗体识别.经乳鼠灌胃试验证实,表达的融合蛋白已丧失天然ST1肠毒素的毒性.免疫实验结果表明,K88ac-ST1-LTB融合蛋白能够诱发家兔产生血清抗体,该抗体具有中和天然ST1肠毒素毒性的作用,表明构建的重组菌株可以作为预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻基因工程疫苗的候选菌株.
其他文献
猪繁殖与呼综合征病毒(PRRSV)0RF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF5)以50μg、100μg和200μg三种剂量肌注免疫BALB/c小鼠,以PBS和空载质粒pcDNA为对照,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)分别对小鼠外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行检测.结果表明,三个剂量的pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗接种小鼠后外周血
本文对CSFV E2与PRRSV GP5重组PRV载体的构建及其生物学特性进行了分析。文章通用转移载体进行了改造,构建了以lacZ为筛选标记并同时表达CSFV E2,PRRSV GP5基因的三基因转移载体，以脂肢体为介质包裹质粒载体DNA与PRV基因组共转染VERO细胞，进行数次蚀斑克隆传代筛选并纯化重组病毒，同时利用Western免疫印迹试验与间接免疫荧光试验检测了E2与GP5的表达情况，并对重
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCCVR2332株的核衣壳蛋白基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物.应用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒GF1107株(GenBank登陆号:AY684124)的ORF7片段.将扩增片段克隆入pMD18-T载体中获得含有相应片段的重组质粒pMDHB-ORF7.对质粒中的插入片段进行序列测定测序.应用DNAstar序列分
本文对表位及多表位疫苗进行了研究。文章围绕免疫显性表位与表位疫苗、显性免疫机制、表位鉴定、表位模拟、表位递呈等进行了论述。
本文对RNA病毒的反向遗传学及其在FMDV研究中的应用进行了研究。文章围绕RNA病毒基因组感染性克隆技术的早期发展、RNA病毒全长cDNA克隆技术的策略、影响全长cDNA感染性克隆的因素、反向遗传学在口蹄疫病毒研究中的应用等进行了论述。
本文对植物生物反应器生产基因工程疫苗进行了研究。文章围绕植物基因工程疫苗的研究现状、植物基因工程疫苗的原理、植物基因工程疫苗的生产方法等进行了论述。
本文对猪轮状病毒病进行了研究。文章围绕猪轮状病毒流行病学与发病机理、临床症状、病理变化、诊断和防治进行了论述。
本文对西尼罗病毒的分子生物学进行了研究。文章围绕西尼罗病毒分子病原学、西尼罗病毒基因组特征、分子诊断技术、分子生物学疫苗等进行了论述。
本文从SARS和禽流感的发生，对树立动物防疫新观念进行了探讨。文章围绕树立预防为主、以人为本的动物防疫新观念和加大人畜共患病防治工作力度进行了论述。
本文对猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒反向遗传操作系统的建立及应用进行了研究。文章提出了对病毒复制非必需的序列，及其可操作限制型酶切位点。同时将不同遗传型的PRRSV株结构蛋白基因替换感染性克隆的相应基因组区域。动物免疫保护试验结果表明，这种嵌和病毒疫苗较现有商品化疫苗免疫性能优良。