【摘 要】
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目的：研究槐甙体内吸收后分布特点，了解槐甙作用的相关靶细胞，研究其对成骨细胞和破骨细胞作用.方法：①采用HPLC/MS/MS法研究槐甙及其代谢物染料木素的分布特点.取SD大鼠24只，体重180-210 g.随机分成4组，每组6只，雌雄各半.禁食但可自由饮水12小时后，p.o.80 mg/kg槐甙，分别于给药后0.25h、3h、6h和20h由股动脉放血处死动物.立即分取心、肝、脾、肺、肾、脑、淋巴、
【机 构】
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上海金木生物科技有限公司 上海市食品药品检验所质量标准研究所
【出 处】
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2009第十七届全国中西医结合骨伤科学术研讨会
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目的：研究槐甙体内吸收后分布特点，了解槐甙作用的相关靶细胞，研究其对成骨细胞和破骨细胞作用.
方法：①采用HPLC/MS/MS法研究槐甙及其代谢物染料木素的分布特点.取SD大鼠24只，体重180-210 g.随机分成4组，每组6只，雌雄各半.禁食但可自由饮水12小时后，p.o.80 mg/kg槐甙，分别于给药后0.25h、3h、6h和20h由股动脉放血处死动物.立即分取心、肝、脾、肺、肾、脑、淋巴、肾上腺、胃、小肠、大肠、盲肠、肌肉、脂肪、骨、子宫，睾丸、卵巢各部位;胃、小肠、大肠和盲肠洗去内容物，每个部位精密称取0.1g，加1ml去离子水制成匀浆，取50 μl，按“生物样品的处理”项下方法操作.②采用新生大鼠头盖骨酶消化法分离培养成骨细胞，取2-3继代细胞给予10-12M、10-10M、10-8M、10-6M、10-4M浓度槐甙，72小时后用MTT法与PNPP法检测细胞增殖与ALP活性：应用新生1-3天龄大鼠四肢长骨机械法分离破骨细胞，给予10-8M、10-6M浓度槐甙，72小时后用染色计数TRAP阳性破骨细胞数，染色计量骨吸收陷窝面积.同时设0(助溶剂)与阳性药物(染料木素与雌二醇)对照.
结果：①药代动力学槐甙和其代谢物染料木素分布试验.槐甙在体内分布较广泛.在组织中槐甙浓度大小为：胃>盲肠>肝>小肠>肌肉>大肠>骨>>肺>脾>淋巴>心>肾上腺>子宫>卵巢>脂肪>睾丸>肾>脑.在所测定的组织中，胃、肝、大肠、小肠、盲肠中槐甙浓度非常高(其原因可能与给药途径有关)，其次在肌肉和骨中有较高浓度，在其余各组织中浓度均较低，脾和脑中药物浓度最低.代谢产物染料木素主要分布于胃、大肠、小肠、盲肠中，浓度显著高于槐甙，其次在肝、脂肪、淋巴和子宫中浓度较高，其余组织中浓度均较低.但骨组织中槐甙浓度高于染料木素.在组织中染料木素浓度依次为：大肠>胃>盲肠>小肠>脂肪>肝>>淋巴>骨>子宫>肺>肾上腺>肾>肌肉>睾丸>心>卵巢>>脾.②体外骨细胞药效学.槐甙与0对照比较显示，10-12、10-10、10-8、10-6、10-4mol/L浓度槐甙显著提高MTT与ALP检测的OD值(P<0.05-0.01).染料木素仅10-8组的增殖刺激作用具有统计学意义(P<0.05).雌二醇10-10、10-8、10-6浓度组的增殖刺激作用均显示统计学意义(P<0.01).对OB分化的影响，与空白组比较，10-12、10-10、10-8、10-6、10-4mol/L浓度槐甙对OB均具有分化刺激作用(P<0.05-0.01);染料木素仅在10-8，10-6mol/L浓度组显示显著分化刺激作用(P<0.01).雌二醇10-10、10-8、10-6mol/L浓度组的分化刺激作用均显示统计学意义(P<0.01).中、高浓度槐甙、染料木素和雌二醇对体外培养。TRAP阳性破骨细胞数均具有显著抑制作用(P<0.01-0.001);与对照组比较，抑制率达20.3%-36.1%.其中10-6浓度组雌二醇的抑制率为36.1%;10-8槐甙组为34.8%.槐甙、染料木素和雌二醇各浓度组对体外培养破骨细胞骨吸收均具有抑制作用，除雌二醇中浓度组，其余均具有统计学意义(P<0.05-0.01);骨片吸收陷窝面积抑制率达22.68%-46.78%.
结论：槐甙能直接吸收入血分布到相关组织和靶细胞中，其代谢物大部分转变成染料木素.骨是槐甙和染料木素的共同靶器官之一.槐甙低、中、高浓度均显著提高成骨细胞的增殖与分化刺激作用，具有骨形成促进作用;染料木素仅在中等浓度组才显著增殖与分化刺激成骨细胞.槐甙与染料木素均能显著抑制体外培养破骨细胞的分化成熟的骨吸收能力，具有破骨细胞骨吸收抑制功能.因此，结合动物试验结果可以确定：槐甙可以口服吸收入血分布到骨组织，具有对成骨细胞骨形成促进与破骨细胞骨吸收抑制双重作用，这可能是槐甙有效防治骨质疏松症的药代动力学与细胞学基础.
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