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目的:天麻酚性成分具有抗脑缺血再灌注损伤(Cerebral Ischemia reperfusion injury,CIRI)的作用,而血管新生是CIRI 后期神经修复的必要条件,是以血管内皮生长因子(VEGF)为代表的多种因子在时间和空间上的协同作用而完成.本研究采用大鼠原代脑微血管内皮细胞(BMECs)体外成环实验及检测大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO/R)7d 后脑组织VEGFA 表达的方法,对4 个天麻酚性成分促血管新生的作用进行初步研究.方法:1.天麻酚性成分对BMECs 体外成环的作用研究:(1)BMECs 的培养与鉴定:取出生10d 的乳鼠,75%酒精消毒后于冰上取出大脑并分离皮层,通过20%BSA 梯度离心获得微血管段,消化获得单个BMECs 进行培养,培养5~7d 细胞汇合成单层后,采用细胞免疫荧光的方法检测内皮细胞特异性蛋白—Ⅷ因子的表达,以鉴定BMECs 的纯度.(2)天麻酚性成分2#、3#、4#、8#对BMECs 体外成环的作用研究:将基质胶加入μ-Slide Angiogenesis培养板中,凝固30min 后加入细胞悬液及受试药物溶液,天麻酚性成分2#、3#、4#的终浓度为1*10-5mol/L,成分8#的终浓度为1*10-7mol/L,培养4h 后观察细胞管状排列并随机选取3 个视野统计管状结构的数量.2.天麻酚性成分3#、4#、8#对大鼠MCAO/R7 天脑组织VEGFA 表达的影响:将60 只SD 大鼠随机分为5 组:假手术组、模型组、3#组(20mg/kg)、4#组(20mg/kg)、8#组(10mg/kg);采用线栓法复制MCAO/R 模型,于脑缺血15min 后灌胃给药,以后每天给药一次,持续给药7d,假手术组、模型组给予等体积的蒸馏水,各组动物于再灌注2h 后进行神经功能学评分,给药7d 后心脏灌流、取脑,制作冰冻切片,采用免疫荧光法检测大脑缺血侧皮层及海马齿状回VEGFA 的表达.结果:1.天麻酚性成分对BMECs 体外成环的作用研究:(1)BMECs 的培养与鉴定:细胞呈涡旋状排列,经Ⅷ因子鉴定表明内皮细胞纯度达99%以上.(2)天麻酚性成分2#、3#、4#、8#对原代BMECs 体外成环的作用研究:与正常组比较,成分4#(5*10-5mol/L)、8#(1*10-7mol/L)能促进BMECs体外成环,差异有统计学意义(P<0.05).成分2#(5*10-5mol/L)、3#(5*10-5mol/L)有促BMECs 体外成环的趋势,但差异没有统计学意义(P>0.05).2.天麻酚性成分3#、4#、8#对大鼠MCAO/R7d 脑组织VEGFA 表达的影响:与假手术组比较,模型组大鼠脑皮层和海马齿状回区域VEGFA 的表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,成分3#(20mg/kg)、4#(20mg/kg)均能升高MCAO/R 模型大鼠脑皮层和海马齿状回区域VEGFA 的表达,差异有统计学意义(P<0.05),成分8#(10mg/kg)能升高MCAO/R模型大鼠皮层VEGFA 的表达,差异有统计学意义(P<0.05).结论:天麻酚性成分4#、8#具有促进BMECs 体外成环的作用,成分3#、4#、8#能升高MCAO/R 模型大鼠脑皮层和海马齿状回区域VEGFA 的表达,表明天麻酚性成分3#、4#、8#对MCAO/R 后有一定促血管新生的作用.