乙型脑炎病毒EⅢ结构域蛋白的表达及多克隆抗体的制备与鉴定

来源 :上海市畜牧兽医学会2013年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangqing1226
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  流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的以中枢神经系统发生病变为主的急性、人畜共患的自然疫源性疾病.该病的流行给养猪业造成巨大的经济损失.JEV主要结构蛋白E由3个结构域(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)组成,其中结构域Ⅲ独立地在病毒表面折叠成为免疫球蛋白样结构,存在多个抗原中和表位,其诱导产生的中和抗体能够阻断JEV进入宿主细胞.本研究利用大肠杆菌表达系统,成功融合表达了JEV EⅢ结构域蛋白,并免疫小鼠制备了多抗血清.Westem-blot结果显示,此多抗能与重组的原核表达蛋白及JEV全病毒蛋白发生特异性反应.IFA检测多抗与细胞内的JEV反应原性,感染病毒组细胞质内呈现强烈荧光,对照组无特异性荧光出现.用空斑减少中和实验检测制备多抗的中和抗体效价达到1∶160.以上数据证明本研究表达的原核表达蛋白具有较好免疫原性,制备的多抗具有较好的反应原性.较有价值的是该抗体具有较高中和抗体效价,本研究制备的多抗将为研发JEV诊断试剂盒及研究JEV E蛋白功能提供了有益实验材料.
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