海南橡胶树棒孢霉落叶病病原鉴定与毒素蛋白分析

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由多主棒孢(Corynespora cassiicola)引起的巴西橡胶树棒孢霉落叶病是我国橡胶产区的一个重要病害。为了更加明确海南橡胶树棒孢霉落叶病菌的类型,2017年4—11月在海南省澄迈县、儋州市、白沙黎族自治县、五指山市、乐东黎族自治县和保亭黎族苗族自治县6个地区采集了300余份橡胶棒孢霉落叶病病叶,对其病原菌进行分离、纯化及病原菌的鉴定。经分离纯化共获得35株菌株,所有菌株在PDA平板上菌落呈黑灰色,边缘灰白色,菌丝生长量缓慢,产孢较少,部分菌株在背面可以产生红褐色同心轮纹。对其产孢条件分析发现病菌在菌丝断裂后,通风光照培养3d可以刺激其产孢,分生孢子呈倒棍棒或圆柱状,直立或稍弯曲,橄榄色至深褪色,具有3~20个假隔膜。通过对ITS、微管蛋白β-tubulin、延伸因子TEF-1基因扩增和序列分析,结合形态学观察,35株菌株均为多主棒孢菌。根据柯赫氏法则对所有菌株进行微伤口接种到橡胶RRIM600健康嫩叶上,10d后均出现明显的"鱼骨"状坏死斑。通过对毒素蛋白检测,所有菌株均检测出Cas5毒素基因,未检测出其他毒素蛋白,由此推测海南省橡胶树棒孢霉落叶病菌为Cas5亚型。目前,关于病原菌的致病性、遗传多样性、Cas5基因表达模式和其致病机理正在研究中。
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