Efficient Rescue of Classical Swine Fever Vi rus from cloned cDNA using an RNA Polymerase Ⅱ System

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hq10000002
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
Conventional reverse genetics for classical swine fever virus(CSFV)is based on the transfection ofpennissive cells with either in vitro.Or intracellularly-synthesized RNA transcripts from a viral genomic eDNA clone·Thesestrategies are complicated,inefficient and time—consuming.This study is aimed to develop an improved reverse genetlcsmethod for me direct.Rapid and efficient recovery of CSFV from cloned eDNA.The eDNA clone,pBRCISM,wasconstructed.Which harbors the full.1ength genomic sequence from the CSFV Shimen strain flanked by the cytomegaloviruspromoter(an RNA polymerase II),a chimeric intron and hammerhead ribozyme sequences at the 5。End,and the hepatitisdelta vims ribozyme and SV40 polyadenylation signal sequences at the 3-end.Infectious progeny virus was rescued fromPK-15 cells directly transfected with pBRCISM and its morphology and one—step growth characteristic were indistinguishablefrom the parent virus and virus rescued from classical reverse genetics.The reverse genetics method based on RNAoolymerase II yielded a 120.Fold increase in the titer of nascent virus in less time(12 h less)than a reverse genetics methodbased on in vitro transcription.The improved reverse genetics method developed in the present study is efficient,convenientand cost.Effective,and will be valuable for the rapid recovery of CSFV mutants.
其他文献
以Pd/C为催化剂、水为溶剂,考察了反应温度、保温时间、氢气压力、催化剂用量、溶剂用量等对纤维素液化的影响。研究结果表明,贵金属Pd/C催化剂条件下可实现纤维素定向液化转化为山梨醇、丙二醇、乙二醇等多元醇;纤维素的转化率随反应温度、保温时间、氢气压力的增加而增加;当反应温度245℃、反应时间30 min、氢气压力6 MPa、Pd/C催化剂用量为原料质量分数的30%时,纤维素转化率可达到95.85%
由于未改性豆粕基木材胶黏剂的粘结性能达不到应用要求,因此本研究采用不同改性剂:十二烷基硫酸钠(SDS)、尿素、环氧树脂E-51/水性胺类同化剂(CS)来改性豆粕基木材胶黏剂。压制的三层杨木胶合板其剪切拉伸强度测试结果表明:蛋白质改性最佳pH值为10.0;E-51/CS的改性效果最好,在E-51/CS添加量7%/14%时剪切拉伸强度已经达到了0.7MPa(GB/T17657—1999);最佳SDS添
以竹节为原料,采用磷酸法制备醋酸乙烯载体活性炭。讨论了温度、浸渍比和保温时间对竹节活性炭的醋酸吸附值和醋酸锌吸附值的影响。实验结果表明,随着温度、浸渍比和保温时间的增加,竹节活性炭的醋酸吸附值呈先升后降的趋势,而醋酸锌吸附值则呈相反趋势。在较优的工艺条件下可制得醋酸吸附值和醋酸锌吸附值为527.5mg/g和7.0g/100mL。
本文对梁山慈竹纤维化单板形态进行了研究。研究表明:节间竹青面和竹黄面、节部竹青面和竹黄面的平均裂隙角度为60°~70°;节间竹青的52%、节部竹青的75%发生脱落;节间竹束平均断面面积1.97mm2,包含4.61个维管束。节部竹束平均断面积1.83 mm2,包含5.14个维管束。
采用丙烯酸丁酯(BA)、丙烯酸(AA)与乙酸乙烯酯共聚,通过改变两者的加入量,合成不同固含量的乳液,并对其理化性能进行探索性研究。结果表明,以BA为单一变量,配比13.35:1.56、固含量35%和AA为单一变量,配比为9.63:5.19、固含量35%时能够合成粘度、力学强度等性能较高乳液。
为探究木纤维增强可生物降解复合材料的制备工艺及其力学性能,采用混炼注射成型工艺制备木纤维和聚乳酸可生物降解复合材料。热重分析探索最佳的可生物降解复合材料加工成型温度,力学性能测试分析了纤维质量分数以及纤维改性处理对复合材料拉仲强度和冲击强度的影响,扫描电镜对复合材料界面进行结构表征。结果表明复。合材料最适加工温度为160℃左右;复合材料的力学性能随着木纤维含量的增加呈现先降低后增加再降低的趋势:利
本文综述竹胶合板的物理力学性能、保温隔音性能、老化与耐候性能、抗震性能、空气质量标准,旨在为竹胶合板在建筑领域的应用提供参考。
采用共聚方法制备碱木质素-苯酚-甲醛共聚胶黏剂(KLPF),研究了碱木质素(KL)替代苯酚量对KLPF性能的影响,并分析其在竹胶板中应用的可行性。结果表明:碱木质素替代苯酚量20~30%,碱木质素-苯酚-甲醛共聚胶黏剂生产的竹胶板性能优异,其静曲强度及其弹性模量、吸水厚度膨胀率、胶合强度等物理力学性能均符合“混凝土模板用竹材胶合板”标准的B类竹材胶合板要求,与纯酚醛胶所压板材的胶合性能相当,且对竹
液化过程主要发生分解反应和缩聚反应。为考察液化前期分解反应产物L10和L60,及液化后期缩聚反应产物L120和L180的可纺性,本文采用二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI)作为合成剂与液化产物反应,制备聚氨酯纺丝液。并通过测定纺丝液的羟值、分析MDI加入量对纺丝过程各因素的影响,最终来确定不同样品制各初纤维的优化工艺条件。结果表明:1)液化后期,产物中的羟值较低;2)液化产物 L10,L60,L120和
热裂解是将生物质转化成为商品位能源和化工产品的关键技术,已经成为世界各国的研究热点。为探究生物质快速热裂解反应特性,本文基于热解气质联用系统(PY-GC/MS)对不同生物质热裂解产物的组成和分布进行了考察。结果表明,生物质热裂解产物的种类主要包括含氧宫能团的酚类、酯类、糖类、醛类、酸类、酮类、醇类等;落叶松热裂解产物相对红橡得到更多的酚类和糖类物质,而酸类物质相对红橡较少;纤维素热裂解主要产物为左