虾蟹螺原体病原学及致病机理研究

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渔业在我省农业中占有重要地位,其中虾蟹产值占总产值的近一半,然而,水产病害制约着水产业的可持续发展,所以国家中长期科学和技术发展规划纲要把水产健康养殖与疫病防控列为重点领域及优先主题。中华绒螯蟹(俗称河蟹)"颤抖病"是水产重大疫病,发病率30-70%,最高死亡率近100%,因而该病在08年被农业部列为《动物疫病名录》中。由于没有准确确定病因从而导致养殖户盲目用药,不仅污染了环境,而且危害水产品品质。我们的研究思路是从查找病原入手,在确定病原的基础上开展有着对性的检测和防治。最初,在电镜下发现了一种类似于立克次氏体的微生物,经过分离纯化及科赫氏法则的验证确定该病原是"颤抖病"的致病原。但在进行分子生物学鉴定时发现其不是立克次氏体,而是螺原体,而螺原体没有存在于水生动物体内的报道,所以我们又进行了分子生物学、细胞生物学、微生物学的进一步验证,最终确定该病原是螺原体。它不仅是一个螺原体的新种,而且是一个新的血清族。这是国际上首次在水生甲壳动物中发现螺原体。传统观念认为螺原体只在陆地的植物和昆虫中交互感染和传播。我们在河蟹体内发现的螺原体是首次在水域中发现螺原体,第一次将人们对螺原体关注范围从陆地扩大到水域,具有重要的生态学意义,提示螺原体对水生动物中的潜在危害。除河蟹外,在克氏原螯虾(俗称小龙虾)、凡纳滨对虾(俗称南美白对虾)、罗氏沼虾及日本沼虾(俗称青虾)中也相继发现螺原体病原,并证实其为重要的病原,揭示了螺原体在经济水生甲壳动物中的广泛分布和危害。螺原体通过鳃或皮肤进入虾蟹体内,并在其靶细胞——血细胞中增殖,然后随血液循环到达全身各器官的结缔组织,引起感染前期的无力和不食,当螺原体侵染到神经组织后便可引起虾蟹附肢的颤抖病症。明确了螺原体侵染虾蟹的靶组织、侵染途径和在体内的增殖方式,我们建立了这些动物体内(机体水平)和体外(细胞水平)的螺原体感染模型。在完成了新型病原螺原体全基因组测序基础上,我们开展了抗原蛋白的筛选、致病相关基因克隆表达、宿主相关免疫机制等病原的分子致病机制的研究,开展了河蟹螺原体比较基因组学研究,并对其与致病相关的功能基因及非编码RNA进行了筛选和研究,初步揭示了螺原体的分子致病机理;同时开展了河蟹micorRNA的筛选及其与免疫相关基因的研究,这些为诠释病原与宿主相互作用中及宿主免疫防御和病原免疫逃逸的分子调控机理奠定了基础。在基础理论研究基础上,我们开展了虾蟹螺原体快速诊断及防控技术研究。建立了虾蟹螺原体病原的五种不同的检测技术,其中基于ELISA方法研制的虾蟹螺原体快速检测试剂盒可以用于水产养殖现场快速诊断,便于推广应用;针对螺原体病原,开展了有效药物的筛选和药敏、药效、药代动力学的研究,建立了科学用药和有效防治螺原体疫病的实用技术,并在多家基层单位推广应用,取得了明显的经济效益、社会效益和生态效益。
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