【摘 要】
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蜂粮是花粉在一定温度和湿度的蜂箱内,通过益生菌的发酵作用酿制而成的高级营养保健功能食品,是一个复杂的微生物系统.高通量测序结果显示Lactobacillus属在东方蜜蜂(Apis cerana Fabricius)和西方蜜蜂(Apis mellifera Linnaeus)的蜂粮中各占0.28%和0.2%.为了获得高品质的乳酸菌用于工业生产,运用改良的Hungate厌氧操作技术、液体培养基和固体培
【机 构】
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四川大学轻纺与食品学院,四川成都610065;农业部沼气科学研究所,四川成都610041 农业部沼
【出 处】
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第八届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会
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蜂粮是花粉在一定温度和湿度的蜂箱内,通过益生菌的发酵作用酿制而成的高级营养保健功能食品,是一个复杂的微生物系统.高通量测序结果显示Lactobacillus属在东方蜜蜂(Apis cerana Fabricius)和西方蜜蜂(Apis mellifera Linnaeus)的蜂粮中各占0.28%和0.2%.为了获得高品质的乳酸菌用于工业生产,运用改良的Hungate厌氧操作技术、液体培养基和固体培养基交替传代的培养方法对蜂粮中乳酸菌进行分离和纯化,观察固体管中菌体单克隆形态;根据乳酸菌生理生化试验对所分离菌株进行初步鉴定;采用液相色谱测定挥发酸含量,筛选出产酸优势菌株;再通过16S rRNA生物学鉴定确定菌株信息.结果 显示:经滚管分离了15株菌,根据乳酸菌的生化特性试验,筛选出8株革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性、淀粉水解阴性、精氨酸产氨试验阴性、V-P试验阴性、产H2S试验阴性、七叶苷水解试验阳性、利用葡萄糖和葡萄酸盐产酸但不产气的乳酸菌.液相色谱测定挥发酸含量发现,产酸能力最强的1株菌为strain 2-3,培养24 h后甲酸含量8011.6 mg/L、乳酸含量9107.88 mg/L、乙酸含量6131.12mg/L、丙酸含量7552.60 mg/L、丁酸和异丁酸含量1163.04 mg/L.strain 2-3在显微镜下菌体多为短杆菌,呈链状或簇状排列,不运动;生理试验表明其为严格厌氧革兰氏阳性菌,生长pH值范围是5.0~7.0,最适pH生长6.0;生长温度范围是15~45℃,最适生长温度为35~37℃;氯化钠浓度范围o~80g/L,最适生长盐浓度为0~1%;可利用的碳源有L邛可拉伯糖、纤维二糖、D-果糖、D-葡萄糖、D-乳糖、D(+)甘露糖、D-甘露醇、蜜二糖、D-山梨醇、蔗糖、木糖、葡萄酸钠、糖原、肌醇、D(-)核糖、海藻糖;不能利用D-半乳糖、D(+)麦芽糖、D(+)棉籽糖、鼠李糖、L-山梨糖.细胞膜脂肪酸主要为C12∶0(0.11%)、C16∶0(18.78%)、C18∶1 w9c(64.03%)、C18∶1 w7c(4.70%).未检测到呼吸醌.极性酯包括3个脂质、7个糖脂、1个磷脂酰甘油、1个双磷脂酰甘油.DNA G+C含量为38.1 mol%.16S rRNA序列的扩增、测序与系统发育学研究结果显示,与stiain 2-3相似度最高的模式菌株为Lactobacillus bombicola sp.LMG 28288T (=DSM 28793T),相似度为97.69%.与模式菌株的基因组DNA的杂交结果显示其相似度为27.3%,初步鉴定strain 2-3为Lactobacillaceae科、Lactobacillus属的新种,Lactobacillus sp.strain 2-3的菌株编号为DSM102188.
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