多被银莲花总皂苷对ACC-M细胞增殖和凋亡的影响

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目的:涎腺腺样囊性癌(SACC),是最常见的涎腺恶性肿瘤之一,具有侵袭性强、浸润性生长,早期沿神经血管束向远处扩展和转移等特征。多被银莲花提取物总皂甙是多倍银莲花经水解和溶剂萃取而来。本实验观察多被银莲花总皂苷诱导ACC-M细胞凋亡和抑制细胞增殖效应,从而为在腺样囊性癌的多模式治疗中拓展新的植物化学药物提供实验依据。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率;瑞-姬染色观测细胞形态变化;Annexin-V-FITC和PI双标记活细胞法检测细胞凋亡率。结果:1 MTT比色试验结果表明多被银莲花总皂苷能抑制ACC-M细胞的增殖,且成剂量依赖性与时间依赖性。相同处理时间不同浓度组之间OD值比较有显著性差异。各药物浓度组不同处理时间生长抑制率也均有明显差异。药效与作用时间和药物浓度均具有正相关性,75ug/ml浓度组生长抑制率与处理时间之间r值为0.936,72h组OD值与药物浓度之间相关系数r值为0.997。药物作用24、48、72h后的IC50分别约为46.3 ug/m1、56.59 ug/ml、44.60 ug/ml,其最高抑制率可达90.3%。2经瑞-姬染色后,用药组细胞与对照组细胞相比体积变小,呈卵圆形,细胞间质减少,细胞间联系降低,胞质浓缩,细胞核变小,核浆比例降低,核仁减少,染色质浓缩,并且出现染色质沿核膜内侧排列的核边集现象,细胞核碎裂,呈现细胞凋亡的现象。3经Annexin-V-FITC和PI双标记活细胞,对照组细胞均属于自然凋亡,24h时凋亡率为18.52%,随着培养时间的增加变化不大,72h的凋亡率为21.11%。经75ug/ml多被银莲花处理24h后,其早、晚期凋亡率为28.4%;处理48h后,上升至30.6%;处理72h后,上升至34%,其凋亡率随处理时间延长而明显上升,各时间组之间有统计学差异。药物作用72h后,0、25、50、75ug/ml多被银莲花组的细胞凋亡率分别为21.7%、22.16%、29.74%、34.0%,细胞凋亡率随药物浓度的升高而增大,各药物浓度组之间有统计学差异。结论:多被银莲花总皂苷能抑制ACC-M细胞的增殖,且成剂量依赖性与时间依赖性;光学显微镜观察凋亡细胞典型形态特征。对照组细胞凋亡率低,用药组细胞凋亡明显;用药组细胞凋亡率随药物浓度增大与处理时间延长而上升,各时间组和各浓度组之间有统计学差异。
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