乳源外泌体富含核酸(microRNA、lncRNA、mRNA、tRNA等)、蛋白质、胆固醇等功能性成分,稳定性好,能够完整地到达肠腔并被吸收,在调节新生儿免疫系统和胃肠道发育方面扮演着重要作用。然而,由于乳基质成分与结构(酪蛋白、乳清蛋白三级结构)的复杂性,导致牛乳外泌体的分离纯化较为困难。此外,目前国际上还没有统一的外泌体定量标准。本研究以牛乳为原料,采取不同方法除去牛乳中酪蛋白、乳清蛋白及脂肪等复杂基质并加以优化,利用超速离心结合超滤分离纯化外泌体;基于乳胶珠与外泌体蛋白结合这一特性,采用流式细胞术对外泌体进行半定量分析。分离纯化获得的外泌体呈杯状结构,直径约为100 nm,含有典型的外泌体标记蛋白,如四跨膜蛋白。与传统乳源外泌体的提取方法相比,本研究建立的提取方法更为简单,分离得到的外泌体纯度更高,且外泌体的损失量更低。