【摘 要】
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目的通过五肽的连接肽构建含变形链球菌表面蛋白A 区(PAc-A)的抗原表位和霍乱毒素B 亚单位(CTB)的嵌合表达质粒,并表达融合蛋白质,为下一步利用转基因植物技术生产可食嵌合体
【机 构】
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浙江宁波市镇海区龙赛医院; 贵州遵义医学院附属口腔医院;
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目的通过五肽的连接肽构建含变形链球菌表面蛋白A 区(PAc-A)的抗原表位和霍乱毒素B 亚单位(CTB)的嵌合表达质粒,并表达融合蛋白质,为下一步利用转基因植物技术生产可食嵌合体防龋疫苗的研究打下基础。方法:用PCR 方法扩增pacA、ctxB1片段,将它们克隆到含T7启动子的pET32a(+)中,构建含双基因的原核表达质粒pEAC5,分别转化E.coli BL-21(DE3)经IPTG 诱导后表达融合蛋白.嵌合表达质粒经酶切、PCR、测序鉴定,融合蛋白经SDS-PAGE 分析.结果:目的基因pacA、ctxB1定向插入至原核表达载体pET32a(+)中,中间连接肽编码序列与设计一致,插入的相位正确,未改变目的基因的阅读框架;表达的融合蛋白分子量与预期的分子量一致。结论:原核嵌合表达质粒pEAC5成功构建并能正确表达融合蛋白。
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