【摘 要】
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目的：构建鸡α干扰素(ChIFN-α)的原核表达体系,优化表达条件.方法：(1)从GenBank库中查找鸡α干扰素(ChIFN-α)基因并且获得其基因序列及蛋白序列,用DNAman软件设计引物.(2)分离并培养鸡血淋巴细胞,提取总RNA,经RT-PCR扩增出鸡α干扰素(ChIFN-α)基因,琼脂糖凝胶电泳后回收与载体pMD 18-T连接,转化到E.coli DH5 α感受态细胞中,筛选阳性菌落.P
【机 构】
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山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,太原 030001
【出 处】
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泛环渤海地区(七省二市)生物化学与分子生物学会2010年学术交流会
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目的：构建鸡α干扰素(ChIFN-α)的原核表达体系,优化表达条件.方法：(1)从GenBank库中查找鸡α干扰素(ChIFN-α)基因并且获得其基因序列及蛋白序列,用DNAman软件设计引物.(2)分离并培养鸡血淋巴细胞,提取总RNA,经RT-PCR扩增出鸡α干扰素(ChIFN-α)基因,琼脂糖凝胶电泳后回收与载体pMD 18-T连接,转化到E.coli DH5 α感受态细胞中,筛选阳性菌落.PCR扩增和酶切鉴定,并进行序列测定,命名为pMD 18-T-Ck α.(3)酶切目的基因并回收纯化后,与载体PET30a载体连接,转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,筛选阳性菌落,并再次进行测序,命名为PET30a-Ck α.
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