【摘 要】
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目的：对磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性分析.方法：将磁纳米颗粒作为基因载体连接 REST-siRNA、SHH-siRNA 体外转染人脂肪间充质干细胞,用普鲁士蓝染色法鉴定磁纳米颗粒对hADSCs 的标记；用台盼蓝染色法检测不同浓度的磁纳米颗粒对hADSCs 活性的影响；用荧光显微镜观察磁纳米颗粒作为基因载体时的转染效率；分别用 Real-
【机 构】
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中国医科大学 教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室 干细胞与再生医学研究室,沈阳 110122
【出 处】
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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委
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目的：对磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性分析.方法：将磁纳米颗粒作为基因载体连接 REST-siRNA、SHH-siRNA 体外转染人脂肪间充质干细胞,用普鲁士蓝染色法鉴定磁纳米颗粒对hADSCs 的标记；用台盼蓝染色法检测不同浓度的磁纳米颗粒对hADSCs 活性的影响；用荧光显微镜观察磁纳米颗粒作为基因载体时的转染效率；分别用 Real-time PCR 和 Western-blot 检测转染后 REST 、SHH 的表达；用 Real-time PCR 检测hADSCs 共转染NRSF-siRNA 和SHH-siRNA 后胰岛分化相关基因的表达情况.结果：磁性纳米颗粒可以作为基因载体转染细胞；用磁性纳米颗粒作为基因载体后,未标记组活细胞比率为 97.12％,铁浓度为 6 和 8mg/L 活细胞比率分别为96.28％和 96.21％,与未标记组无差异；铁浓度为 10 和 12mg/L 活细胞比率分别为 79.03％和 70.23％,显著低于未标记组；荧光显微镜观察转染效率为71％；磁纳米颗粒作为基因载体时REST RNA表达量为(0.46±0.04),蛋白水平表达量为(0.501±0.006)；SHH RNA 表达量为(0.53±0.05),蛋白水平表达量为(0.523±0.004)；磁纳米颗粒作为基因载体共转染NRSF-siRNA 和SHH-siRNA 后,通过Real-time PCR 相对定量法检测胰岛分化相关基因的表达,结果显示,insulin、pdx1、pax4、ngn3 的表达都呈不同程度的升高.
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