论文部分内容阅读
目的:通过建立体外氧糖剥夺模型模拟缺血缺氧环境,探讨自噬在轴突导向因子netrin-1对脑微血管内皮细胞氧糖剥夺损伤后保护作用中的调节作用。方法:将netrin-1和自噬抑制剂LY294002分别单独和同时作用于脑微血管内皮细胞,更换DMEM无糖培养液,将细胞置于37℃含95% N2/5% CO2混合气体的缺氧环境中从而建立氧糖剥夺环境,用CCK-8试剂盒及Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒检测细胞活性;Western Blot检测自噬相关蛋白P62和LC3的表达变化及UNC5H2受体在氧糖剥夺后的表达变化;用UNC5H2 siRNA干扰使脑微血管内皮细胞表达UNC5H2下降,将netrin-1及netrin-1与LY294002同时作用于UNC5H2 siRNA干扰后的脑微血管内皮细胞,用CCK-8试剂盒及Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒检测细胞活性。