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目的：探讨原核表达的HPV6b和HPV11 E7全长基因的重组蛋白作ELISA抗原，检测尖锐湿疣患者血清和阴道分泌物抗体水平，为HPV6b和11型感染的血清学诊断研究奠定基础。
方法：分别用HPV6b和11 E7特异性引物在湿疣组织中扩增E7蛋白基因的全长序列，构建重组质粒pET32a(+)/HPV6b E7和pET32a(+)/HPV11 E7，经酶切和测序分析鉴定后分别转化至E.Coli BL21(DE3)中，经诱导表达融合蛋白，并用SDS-PAGE和Western blot方法分析鉴定，并以HPV6b和11型湿疣患者的阳性血清作一抗，进一步用Western blot分析该融合蛋白的抗原性；分别以纯化的HPV6b和11 E7融合蛋白作诊断抗原，用间接ELISA法检测尖锐湿疣患者(106例)、宫颈癌患者(43例)及健康对照者(98例)血清IgG抗体，同时检测CA患者(77例)、健康对照者(115例)阴道分泌物sIgA抗体。根据健康对照组血清及阴道分泌物抗体的平均A值计算出阳性判定值(Cut off值)(健康对照组血清及阴道分泌物抗体平均A值＋2S)，以此评估尖锐湿疣患者的血清和阴道分泌物抗体阳性检出率及ELISA方法诊断尖锐湿疣的敏感度和特异度；并分别比较HPV6b和11 E7融合蛋白血清及阴道分泌物抗体水平与HPV感染型别的关系，以分析基于目的蛋白的ELISA方法用于诊断HPV6b和11型感染的敏感度。
结果：
(1)pET32a(+)/HPV6b E7和pET32a(+)/HPV11 E7 重组质粒分别在大肠杆菌E.Coli BL21(DE3)内成功表达了融合蛋白，经SDS-PAGE电泳分析见约30kDa大小的蛋白条带，并经Western blot鉴定为目的蛋白，HPV6b和HPV11 E7融合蛋白纯化后通过核酸蛋白检测仪检测的浓度分别为40μg/ml和46μg/ml；分别以HPV6b E7和HPV11 E7阳性CA患者血清作一抗，经Western blot鉴定HPV6b E7和HPV11E7融合蛋白出现阳性条带。
(2)分别以HPV6b E7和HPV11 E7融合蛋白作为诊断抗原用，间接ELISA方法检测CA患者、宫颈癌患者和健康对照者血清IgG抗体：
①HPV6b E7抗体均值分别为1.655±0.130、1.366±0.110和1.44±0.14；HPV11 E7抗体均值分别为1.545±0.131、0.586 ±0.155和0.674 ±0.150。CA组较宫颈癌组及健康对照组HPV6b E7和HPV11 E7抗体均值差异均有显著性(P<0.01)，而宫颈癌组较对照组抗体均值差异均无显著性(P>0.05)。
②HPV6b E7抗体阳性率分别为67.9％(70/106)、13.9％(6/43)和7.1％(7/98)；HPV11 E7抗体阳性率分别为75.5％(80/106)、11.6％(5/43)和7.1％(7/98)。CA组较宫颈癌组及健康对照组HPV6b E7和HPV11 E7抗体阳性率差异均有显著性(P<0.01)而宫颈癌组较对照组差异则均无显著性(P>0.05)。
③CA组中女性患者HPV6b E7和HPV11E7抗体阳性率分别为73.3％(66/90)和82.5％(74/90)，男性患者抗体阳性率分别为25％(4/16)和37.5％(6/16)。女性组均高于男性组(P<0.01)。
④基于HPV6b E7和HPV11 E7融合蛋白的ELISA用于检测CA患者敏感度分别为67.9％(70/106)和75.5％(80/106)；特异度均为92.9％(91/98)。
(3)分别以HPV6b E7和HPV11 E7融合蛋白作为诊断抗原，用间接ELISA方法检测CA患者和健康对照者阴道分泌物sIgA抗体：
①HPV6b E7抗体均值分别为0.061±0.01和0.060 ±0.0047，HPV11 E7抗体均值分别为0.07±0.01和0.05±0.007。CA患者较健康对照组抗体均值差异均有显著性(P<0.01)。
②HPV6b E7抗体阳性率分别为42.9％(33/77)和7.8％(9/115)，HPV11 E7抗体阳性率分别为36.3％(28/77)和5.2％(6/115)。CA组阳性率较健康对照组差异均有显著性(P<0.01)。
③基于HPV6b E7和HPV11 E7融合蛋白的ELISA用于检测CA患者敏感度分别为42.9％(33/77)和36.3％(28/77)；特异度分别为92.2％(106/115)和94.8％(109/115)。
结论：以HPV6b E7和HPV11 E7融合蛋白作为诊断抗原，用ELISA法可检测CA患者和健康对照者血清和阴道分泌物及宫颈癌血清特异性抗体，并具较高的特异性，具有易操作、低成本的优点，对CA血清学诊断试剂的研究及使用HPV疫苗的免疫效应检测等方面具有应用价值。