丹参调节肝脏NK细胞功能对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的作用

来源 :第二十六届全国中西医结合消化系统疾病学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kaifawendang06
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  目的:观察丹参对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠肝脏NK细胞功能的影响,并在体外观察其调节肝脏NK细胞功能抗肝纤维化的免疫调节机制.方法:CCl4诱导肝纤维化小鼠模型,分为正常组及模型组.其中正常组分为正常对照组、丹参对照组;模型组分为模型对照组、丹参1.5g/kg组和丹参3.0g/kg组.模型组小鼠均予腹腔注射10% CCl4造模,剂量为2ml/kg,2天1次,每周连续3次,共连续4周.正常组小鼠于同一时间予腹腔注射等剂量橄榄油.自造模之日起,腹腔注射6小时后,丹参对照组、丹参1.5g/kg组和丹参3.0g/kg组分别均予丹参灌胃,剂量分别为3.0g/kg、 1.5g/kg和3.0g/kg,每天一次,连续7天,连续4周.正常对照组与模型对照组均于相同时间予0.5%羧甲基纤维素钠8ml/kg灌胃,每天1次,连续7天,连续4周.造模4周后,测定小鼠血清ALT、AST、Alb、T.Bil水平;分离小鼠肝脏淋巴细胞,流式检测肝脏NK细胞及其细胞表面NKG2D和Ly49A受体表达;HE和天狼星红染色分别观察肝组织炎症和胶原沉积情况;Nkp46和Desmin免疫荧光共染,观察肝脏NK细胞和HSC的分布情况.分离原代肝脏NK细胞,分别加入10、50、100μg/ml丹参连续预孵育8h和16h,PCR检测NK细胞NKG2D、Ly49A、IFN-γ、Trail和Perforin表达.将NK细胞与JS-1按照50:1的比率连续共培养5h后,PCR检测NK细胞NKG2D、Ly49A、IFN-γ、Trail和Perforin表达和JS-1肝星状细胞α-SMA、RAE-1δ及RAE-1ε表达.结果:与正常对照组相比,丹参对照组小鼠无明显肝损伤,肝内NK细胞比例增多;模型对照组血清ALT、AST、T.Bil水平及肝组织Hyp含量升高,血清Alb水平降低,HE染色均显示肝组织结构不同程度被破坏,天狼星红染色提示有大量胶原纤维增生沉积.与模型对照组相比,丹参对肝纤维化小鼠肝内NK细胞比例及NK细胞膜上激活性受体NKG2D有明显促进作用.与模型对照组相比,经丹参给药的模型小鼠肝脏HSC周围聚集大量NK细胞,Nkp46 (NK细胞)表达明显增多,Desmin(HSC细胞)表达明显减少.经丹参预孵育的NK细胞NKG2D、IFN-γ、 Perforin、Trail表达增多.与JS-1肝星状细胞共培养后,NK细胞NKG2D、Trail及Perforin表达增多,JS-1肝星状细胞α-SMA及RAE-1ε表达减少.结论:丹参在体内和体外均可激活肝脏NK细胞功能和活性而抗肝纤维化.
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