洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和NF-κB表达的影响

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目的观察中药复方洁泽1号对白色念珠菌与人阴道上皮细胞粘附率的影响以及洁泽1号对白色念珠菌刺激后的阴道上皮细胞,其天然免疫因子TLR4及NF-κB表达的干预作用,探讨洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌感染的部分天然免疫机制。方法培养人阴道上皮细胞株(VK2/E6E7)。设置空白对照组、模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。将人阴道上皮细胞(VK2/E6E7)以不同药物的处理相应时间,MTT法检测洁泽1号及小檗碱的药物细胞毒性、流式细胞术检测白色念珠菌与阴道上皮细胞的粘附率。另将人阴道上皮细胞与白色念珠菌灭活孢子37℃共培养12小时后,与药物共孵育相应时间。免疫荧光技术观察TLR4在胞浆的表达时间以及NF-κB由胞浆进入胞核的时间,Western-blotting技术检测经白色念珠菌刺激后阴道上皮细胞TLR4的表达及NF-κB在细胞核内的表达。结果洁泽1号组、小檗碱组较模型组VK2/E6E7细胞与白念菌粘附率下降,结果有统计学意义(p<0.05),较甘露糖组粘附率增高,结果有统计学意义(p<0.05),甘露糖组较模型组粘附率下降,结果有统计学意义(p<0.01),高碘酸组较模型组结果无统计学意义(p>0.05)。在TLR4的表达上,模型组与正常组相比,TLR4表达增多,结果有极显著统计学意义(P<0.01)。甘露聚糖组与模型组相比,TLR4表达无统计学意义(P>0.05);洁泽1号组、小檗碱组、高碘酸组较模型组减少,均有极显著统计学意义(P<0.01)。在NF-κB的表达上,模型组与正常组相比,NF-κB表达增多,结果有极显著统计学意义(P<0.01)。高碘酸组、洁泽1号组、小檗碱较模型组NF-κB表达减少,结果均有极显著统计学意义(P<0.01);甘露糖组较模型组NF-κB表达增多,其结果有统计学意义(P<0.01),高碘酸、小檗碱与洁泽1号组之间无统计学差异(P>0.05)。结论中药复方洁泽1号能减少白色念珠菌与宿主细胞,即VK2/E6E7的粘附,增强阴道上皮细胞抵抗念珠菌入侵的能力。洁泽1号下调感染白色念珠菌后VK2/E6E7细胞天然免疫因子TLR4的表达、减少细胞内NF-κB的激活,可能因此导致其下游炎性因子分泌减少,起到阻止急性炎症反应的作用。
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