【摘 要】
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目的:鉴定两株蝙蝠蛾幼虫活体肠道的真菌分离株,CH1和CH2;检测它们与中国被毛孢分生孢子联合侵染蝙蝠蛾幼虫的协同侵染效能.
方法:应用菌物学显微形态学鉴定,并应用蝙蝠
【机 构】
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青海省畜牧兽医科学院草原研究所,西宁青海810016香港理工大学应用生物学和化学科技系,香港
【出 处】
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2015首届全国虫草会议暨冬虫夏草产业高峰论坛
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目的:鉴定两株蝙蝠蛾幼虫活体肠道的真菌分离株,CH1和CH2;检测它们与中国被毛孢分生孢子联合侵染蝙蝠蛾幼虫的协同侵染效能.
方法:应用菌物学显微形态学鉴定,并应用蝙蝠蛾拟青霉特异性引物PCR测序、克隆测序和SNP(Single Nucleotide Polymorphism单核苷酸多态性)质谱基因分型法,鉴定这两个真菌分离株,确定其分类学地位.应用这两株分离株和老熟中国被毛孢分生孢子联合侵染4-5龄蝙蝠蛾幼虫,观察其协同侵染活性.
结果:显微观察发现这两株分离株呈现中国被毛孢的形态特征.通用引物ITS4/5 PCR扩增子测序检出中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉ITS序列.蝙蝠蛾拟青霉特异性引物Pp4/5扩增子测序证实蝙蝠蛾拟青霉序列的存在.应用SNP基因分型法证实多种转换和颠换点突变基因型在两个分离株中共存.检测数个纯化的中国被毛孢菌株进一步证实了这一菌种复合体现象.反复固体、液体培养可分离的、共存的中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉,证实ITS序列共存并非真菌间DNA片段的基因漂移.应用子囊孢子、中国被毛孢的分生孢子或菌丝体侵染4-5龄蝙蝠蛾幼虫(5批,每批100头),幼虫染菌率为1.37％至3.52％,幼虫变僵时间为35-50天.应用两个分离株与中国被毛孢分生孢子联合侵染,幼虫变僵时间为5-8天,染菌率高达55.2％ (p＜0.001),侵染效能增加15-39倍.
结论:中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和多种点突变基因型冬虫夏草菌在蝙蝠蛾幼虫肠道以天然菌种复合体形式共存,不易彻底分离纯化;联合侵染蝙蝠蛾幼虫可大幅度提高侵染效能.多菌协同侵染作用为研究冬虫夏草发生的首要环节开辟了一条新路.
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