【摘 要】
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目的 探索低氧环境下生长分化因子-5 (GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs)"自组装"形成工程化软骨的可行性和有效性.方法 分离培养hMSCs,流式细胞学方法鉴定.将hMSCs用含100ng/ml GDF-5软骨诱导液(conditioned medium,CM)分别在低氧(A组)和正常氧(B组)环境下诱导培养3周,RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白和Aggrecan表达情况.将A,B两组h
【机 构】
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华中科技大学附属协和医院骨科,武汉,430022 华中科技大学协和医院骨疾病研究所
【出 处】
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全国骨关节与风湿病暨第三届武汉国际骨科高峰论坛
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目的 探索低氧环境下生长分化因子-5 (GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs)"自组装"形成工程化软骨的可行性和有效性.方法 分离培养hMSCs,流式细胞学方法鉴定.将hMSCs用含100ng/ml GDF-5软骨诱导液(conditioned medium,CM)分别在低氧(A组)和正常氧(B组)环境下诱导培养3周,RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白和Aggrecan表达情况.将A,B两组hMSCs消化后,按一定密度接种于2％琼脂糖包被的24孔板,在不同氧浓度下CM继续诱导3周,免疫组化方法检测组织Ⅰ,Ⅱ胶原表达,甲苯胺蓝染色检测葡萄糖胺聚糖(GAG)表达.结果 hMSCs呈梭形漩涡状生长,高表达CD44、CD29,不表达CD45分子.含GDF-5的CM诱导hMSCs3周后,Ⅱ型胶原和Aggrecan mRNA表达阳性,A组Ⅱ型胶原和Aggrecan表达量较B组均明显增加(P＜0.05).GDF-5诱导入骨髓间充质干细胞可"自组装"形成一定形状大小类软骨样组织,低氧环境下组织块Ⅱ型胶原表达增加,Ⅰ胶原表达量下降,甲苯胺蓝染色异染加深.结论 低氧促进GDF-5诱导hMSCs向软骨分化,低氧环境下GDF-5诱导软骨分化的hMSCs"自组装"形成的工程化软骨更具有软骨表型.
其他文献
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