超强毒IBDV细胞克隆化毒回鸡后的致病性与VP2基因高变区的分子变化

来源 :中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dreamagain1986
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为了研究超强毒鸡传染性法氏囊病病毒(vvIBDV)的致病性及其VP<,2>基因高变区的分子变化,本研究以vvIBDV GX8/99株囊毒为研究对象,将该毒在SPF鸡胚连传10代后,再在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续盲传.该病毒在CEF上传至22代时开始引发CEF细胞病变,随之在96孔细胞培养板上用无限稀释法连续克隆2次后获得了4个病毒克隆,再将该4个病毒克隆分别连续回传3~5周龄SPF鸡10代.分别比较4个克隆毒及其回传SPF鸡后不同传代毒对4~6周龄SPF鸡的致病性及VP<,2>高变区氨基酸分子的变化,结果表明4个克隆化毒的细胞培养毒对SPF鸡只有0~6.7﹪的致死率,不同克隆毒的SPF鸡传代毒对SPF鸡的致病性却都逐渐增强,但程度差异很大,其中克隆<#>5在回鸡1、5和10代后的致死率从0分别增加到10﹪、20﹪和27﹪;克隆<#>4从6.7﹪增加至13﹪、17﹪和23﹪;但克隆<#>1和<#>3的致病性变化相对较小.相对于原始囊毒及鸡胚毒,4个克隆化毒在测序的VP<,2>高变区的约145个氨基酸中,有10个位点发生了相同的变异,变得与适应细胞的疫苗毒D<,78>株基本一致,在回鸡传代导致对鸡的毒力增强的过程中,这10个位点中大多数氨基酸不再变化,只有第253位和256位氨基酸从囊毒的Q和I变为细胞适应毒的H和V后,有些病毒克隆回鸡至第10代时又变为原囊毒的Q和I,这表明VP<,2>高变区大多数氨基酸的变异可能与病毒的致病性关系不密切,而与对细胞培养或组织的亲和性的关系更为密切.本研究最重要的意义在于建立的超强毒GX8/99株细胞克隆化毒及其相应的回鸡传代毒系列,为研究vvIBDV其它基因变异与致病性及其它生物学特性的关系提供了一个新的技术平台和必要的研究材料.
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