论文部分内容阅读
目的：研究大鼠肝脏缺血预处理(IP)过程中血浆一氧化氮(NO)水平及肝脏一氧化氮合成酶(NOS)转录、表达的改变,探讨大鼠肝脏IP过程中NO合成通路的作用及意义。
方法：雄性SD大鼠随机分为3组：缺血再灌注(I／R)组、IP组及假手术(S)组,术后2 h、24 h及1周时分批处死大鼠,取血液及肝脏标本。用硝酸还原酶法检测血浆NO浓度；自动生化分析检测血清AST及ALT活性；免疫组织化学方法检测NOS在肝脏组织的表达)WesternBlot的方法检测肝脏NOS2；原位杂交的方法检测肝脏NOS2 mRNA)免疫组织化学的方法检测肝脏NFkB的P65亚基；常规形态学检测肝脏的组织病理改变。
结果表明：
1)IP组血浆NO在术后即升高,于2 h(P<0.01)及24h(P<0.01)时均显著高于I／R组,于3个时间点均显著高于S组(P<0.05)；I／R组在2 h时显著低于S组(P<0.05),24 h与S组无统计学差异(P>0.05),1周时显著高于S组(P<0.05)。
2)血清ALT及AST：a.IP组ALT于3个时间点均显著低于I／R组(P<0.05),在2 h(P<0.05)及24 h(P<0.01)时均显著高于S组,1周时IP组与S组间差异无显著性；I／R组于3个时间点均显著高于S组(P<0.05)。b.IP组与VR组AST无显著性差异(P>0.05),在24 h时IP组显著高于S组(P<0.05),I／R组在2 h(P<0.05)及24h(P<0.01)时显著高于S组。c.IP组及I／R组血浆NO与ALT呈负相关(P<0.0l,P<0.05),而与AST组相关性不明显(P>0.05)。
3)肝脏NOS免疫组织化学.a.NOSl,NOS3在肝脏组织内未见明显着色。b.肝脏NOS2显色深度在24 h时均显著强于2 h及1周时显色；IP组在2 h及24 h时均显著高于I／R组及S组(P<0.05),I／R组与S组之问差异不显著(P>0.05)；1周后,S组NOS2显色呈阴性,lP组及I／R组呈弱阳性,后两组间差异不显著(P>0.05),但均强于S组(P>0.05)。
4)肝脏NOS2mRNA原位杂交：IP组在2 h及24 h时染色较I／R组深,IP组在2 h呈弱阳性,24 h时呈阳性,I／R组2 h时呈阴性,24 h时呈弱阳性,1周时IP组及I／R组呈弱阳性。
5)肝脏P65免疫组化：2 h及24h时IP组在胞浆及胞核染色呈阳性,程度较I／R组深,后者呈弱阳性；1周时,IP组及I／R组胞浆及胞核显色呈弱阳性,S组胞浆呈弱阳性,胞核呈阴性。
6)肝脏组织苏木素-伊红(HE)染色：2h后肝脏组织呈弥漫性水肿,24 h后达到高峰,并出现细胞坏死,其中I／R组最为明显,出现灶状坏死及散在片状坏死,IP组为散在点状及灶状坏死；1周时,IP组及S组肝脏组织基本恢复正常,而I／R组可见肝小叶内纤维化、假小叶形成及大量炎性细胞浸润。
结论：
1)血清ALT下降,肝脏组织损伤减轻,进一步证实了肝脏IP对I／R损伤具有保护作用；
2)IP后肝脏NO合成增加,血清ALT下降,肝脏损伤减轻,提示NO合成增加与肝脏IP保护作用有关,NO是肝脏IP发挥保护效应中一个重要的活性分子；
3)IP后肝脏组织NOSl及NOS3未见明显表达,NOS2转录及表达显著增强,提示肝脏IP后NO的升高与NOS2的转录表达增强有关,与NOSl及NOS3无明显相关；
4)肝脏IP过程中NOS2转录与表达增强可能与NFkB亚基P65的表达增强及迅速转位至核内有关；
5)肝脏NOS2转录、表达及NO合成的峰值时相提前与经典的IP保护作用时间重叠,表明NO合成通路的提前上调与经典IP保护效应有关,肝脏NOS2持续较高水平的表达与延迟的IP保护效应相重叠,提示NO合成通路的时程的延长与延迟的IP保护效应有关。