细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是在细胞膜上生成并以出芽的方式分泌到细胞外的磷脂双分子层包裹的小囊泡,直径约30nm至数微米,其内包含蛋白质、脂类、DNA和RNA等多种成分,起到与附近及远距离细胞通讯的作用。外泌体(exosomes)是一种直径小于150 nm的EVs,而采用经典的超速离心加滤膜过滤提取外体的方法,得到的其实是一些小EVs的混合物。对提取的外泌体进行形态鉴定的经典方法是采用负染后透射电镜观察,具有简便快捷的优点。常用负染染液有多种,每种染液都具有不同染色的特性。本研究针对常用的三种电镜负染染液(磷钨酸,醋酸双氧铀,钼酸铵)对EVs的负染效果进行了比对。试验发现,磷钨酸染液对EVs负染效果相对较差,染液在囊泡膜周围易聚集,在电镜下观察发现,囊泡边缘电子密度较高,颗粒感明显。醋酸双氧铀的染色效果最佳,能在电镜下分辨出三种典型的囊泡结构,且囊泡形态结构清晰,染色背景干净,但是醋酸双氧铀染液见光易分解,需要现用现配,具有一定的放射性。钼酸铵染液效果与磷钨酸类似,但是对囊泡膜结构边缘染色更为清楚锐利。经过前期试验,我们发现采用钼酸铵染液作为EVs负染的常用染液,具有易存储,毒性相对较低,试剂价格低的优势。