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本研究采用PCR技术克隆了牛分支杆菌ag85b基因，对目的基因片段和载体pET-28a以核酸内切酶NdeⅠ和HindⅢ分别进行双酶切，将两种酶切产物以T4DNA Ligase连接，构建了重组表达载体pET-28a-ag85b，进而将重组表达载体转入受体菌BL21(DE3)中进行诱导表达，通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定Ag85B蛋白的表达情况。结果表明，成功构建了ag85B基因的重组表达载体，经SDS-PAGE分析，诱导表达的重组蛋白分子质量单位约为33kDa, Western blot鉴定结果表明，表达产物能被特异性抗体所识别，表明成功表达了Ag85B蛋白，为进一步研究预防牛结核病的新型疫苗奠定了基础。