【摘 要】
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目的:建立KLK1转基因大鼠模型. 方法:腹腔注射PMSG-HCG(150~150 IU/kg)超排不同周龄(4~8周)SD大鼠比较超排效果的差异,以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄.构建
【机 构】
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中国医科大学实验动物部辽宁省实验动物转基因重点实验室,沈阳,110001
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目的:建立KLK1转基因大鼠模型.
方法:腹腔注射PMSG-HCG(150~150 IU/kg)超排不同周龄(4~8周)SD大鼠比较超排效果的差异,以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄.构建pBC-klk1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内.出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达.
结果: 4~8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7,5周龄大鼠超排效果最好,与其他周龄大鼠相比有显差异,P<0.05;显微注射1538枚卵,移植685(44.53%)枚卵于31只受体输卵管中,12(12/31,38.7%)只怀孕,共产仔62只,经PCR检测获得6只阳性鼠,Southern检测3只阳性.对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达.
结论:成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型,该模型是高血压病研究的理想动物模型.
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