【摘 要】
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目的:探索用PGenesil-1 (Pg)构建的靶向乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的shRNA表达载体PGenesil-1-HBs(简称Pgs),对体外培养HepG2.2.15细胞中的HBV基因及其抗原表达的抑
【机 构】
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重庆医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室,重庆400016
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目的:探索用PGenesil-1 (Pg)构建的靶向乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的shRNA表达载体PGenesil-1-HBs(简称Pgs),对体外培养HepG2.2.15细胞中的HBV基因及其抗原表达的抑制作用.方法:设计、合成靶向HBV S区的三对DNA序列,分别插入PGenesil-1中、构建三个siRNA表达载体Pgs1 、Pgs2、Pgs3,经限制性内切酶,DNA序列测定等技术鉴定确认.经多次实验筛选并确定最佳细胞接种量及重组质粒转染量后,分别或按不同组合转染HepG-2.2.15细胞,48小时后,采用半定量RT-PCR检测HBVsmRNA转录水平,免疫细胞化学技术检测HBsAg表达水平,MEIA分别检测细胞裂解液和培养上清中HBsAg和HBeAg的表达水平.
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