人间充质干细胞提取液及培养上清在两种小鼠干眼模型中的治疗研究

来源 :第十二届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第四届全国角膜屈光手术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:deterly
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  目的:观察人间充质干细胞提取液及培养上清在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠自发干燥综合征所致干眼和苯扎氯铵诱导的小鼠干眼模型中的治疗作用,并探讨其可能的作用机制.方法:分离纯化人脐带间充质干细胞(hUMSC)和作为对照细胞的入角膜基质成纤维细胞(hCSF),收集纯化三代的细胞用流式细胞术检测其干细胞表面标志物并制备培养上清及细胞提取液,配制成相同蛋白浓度的滴眼液.将0.15%苯扎氯铵诱导的干眼小鼠和10周龄雄性NOD小鼠分别随机分为五组:PBS组、牛血清白蛋白(BSA)组、hUMSC提取液组、hUMSC培养上清组、hCSF提取液组.各组分别采用上述滴眼液每天三次,于治疗前、治疗第4天和第8天观察并记录泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌(酚红棉线)测试、角膜荧光染色(FL)、角膜炎症指数评分情况.采用苏木素一伊红(HE)染色观察评估泪腺和角膜细胞凋亡和淋巴细胞浸润情况,采用TUNEL方法检测细胞凋亡,免疫染色检测眼表细胞增殖标志物Ki-67、杯状细胞AS染色、神经标志物染色等,Western Blot检测炎症因子表达情况.结果:在苯扎氯铵诱导的小鼠干眼和NOD小鼠干燥综合征模型中,间充质干细胞提取液和培养上清组与PBS组、BSA组和hCSF提取液组相比,在治疗前第4天和第8天BUT、角膜荧光染色和炎症指数评估均较治疗前有显著改善(P<0.01).在NOD小鼠模型,干细胞治疗组泪腺分泌功能较治疗前显著增加,但泪腺淋巴细胞浸润无明显减少.流式细胞术检测hCSF的干细胞表面标志物(CD34-,CD45-,CD14-,CD29+,CD44+, CD105+,CD90+)也显示出与hUMSC相似的表达模式,但是其对干眼泪腺分泌功能、BUT、角膜荧光染色和炎症的改善情况显著低于hUMSC.结论:脐带间充质干细胞提取液和培养上清均可通过稳定泪膜、维持角膜上皮的完整和改善炎症状况在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠自发干燥综合征所致干眼和苯扎氯铵诱导的小鼠干眼模型中发挥治疗作用,局部滴眼可显著改善NOD小鼠自发性泪腺炎的泪液分泌功能,但其改善泪腺分泌功能的机制及抑制眼表炎症、凋亡及神经保护的机制仍有待进一步阐明.结果提示脐带来源的间充质干细胞提取物在治疗干眼方面具有潜在的临床价值.
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