【摘 要】
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目的 构建高效表达肌酐水解酶的乳酸工程菌,并比较其产酶活性.方法 从斯氏假单胞菌A1501中提取基因组DNA,根据genbank上已知的固氮斯氏假单胞菌肌酐水解酶基因序列,设计引物PCR扩增肌酐水解酶基因片段,经测序鉴定后将其分别克隆入质粒pMG36e,PNZ8048构建成重组质粒pMG36e-Cr、PNZ8048-Cr,并分别转化大肠杆菌DH5α及MC1061,筛选鉴定,提取重组质粒PMG36e
【机 构】
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中南大学肾脏病研究所中南大学湘雅二医院肾内科湖南省肾脏疾病与血液净化重点实验室
【出 处】
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2011中华医学会肾脏病学分会血液净化论坛暨黑龙江省医学会肾脏病学年会
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目的 构建高效表达肌酐水解酶的乳酸工程菌,并比较其产酶活性.方法 从斯氏假单胞菌A1501中提取基因组DNA,根据genbank上已知的固氮斯氏假单胞菌肌酐水解酶基因序列,设计引物PCR扩增肌酐水解酶基因片段,经测序鉴定后将其分别克隆入质粒pMG36e,PNZ8048构建成重组质粒pMG36e-Cr、PNZ8048-Cr,并分别转化大肠杆菌DH5α及MC1061,筛选鉴定,提取重组质粒PMG36e-Cr、PNZ8048-Cr,电穿孔转化乳酸菌L.lactis NZ9000,筛选鉴定.制备基因工程菌粗酶液,进行SDS-PAGE分析,并测定粗酶液肌酐水解酶的活性.
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