【摘 要】
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目的:构建抗克伦特罗(CBL)单链抗体噬菌体展示文库(scFv phage displaylibraries),从中筛选CBL特异性噬菌体单链抗体(phage scFv)。方法:提取经CBL免疫的小鼠的脾脏总RNA, RT
【机 构】
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广东省教育厅食品质量安全重点实验室／华南农业大学食品质量安全研究所; 广州军区广州总医院医学试验科;
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目的:构建抗克伦特罗(CBL)单链抗体噬菌体展示文库(scFv phage displaylibraries),从中筛选CBL特异性噬菌体单链抗体(phage scFv)。方法:提取经CBL免疫的小鼠的脾脏总RNA, RT-PCR扩增全套抗体轻链可变区(V_L)及重链可变区(V_H)基因,重叠延伸法将V_L、V_H片段拼接为单链抗体(scFv)基因片段。将scFv克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化感受态大肠杆菌TGl,用辅助噬菌体M1 3KO7进行超感染,构建噬菌体单链抗体库。对抗体库进行亲合富集后,ELISA法筛选阳性克隆。结果:扩增出抗CBL的V_L、V_H基因片段并拼接为全长的scFv,抗体库库容约为1.6×10~4,经4轮"吸附-洗脱-扩增"的富集,ELISA筛选到6个具有CBL结合活性的phage-scFv。结论:成功构建抗CBL单链抗体噬菌体展示库,并初步筛选到具有CBL结合活性的噬菌体scFv,特异性好,为进一步大量表达CBL单链抗体奠定了基础。
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