【摘 要】
：
目的 评价采用多重置换扩增(MDA)对单细胞进行全基因组扩增,并同时对α-地中海贫血和罗氏易位的诊断效率.方法 一对夫妇双方均为α-地中海贫血(--SEA/αα)携带者,同时男方为罗氏易位患者45,XY,rob(13∶14)(p10；p10),到本中心要求行植入前遗传学诊断(PGD).第一周期于第三天行卵裂球活检采用FISH方法进行罗氏易位诊断,第五天采用囊胚活检采用荧光PCR法进行α-地中海贫血
【机 构】
：
中山大学附属第一医院生殖医学中心,广州 510080
【出 处】
：
广东省医学会第一次生殖医学学术会议暨广东省医学会生殖医学分会成立大会
论文部分内容阅读
目的 评价采用多重置换扩增(MDA)对单细胞进行全基因组扩增,并同时对α-地中海贫血和罗氏易位的诊断效率.方法 一对夫妇双方均为α-地中海贫血(--SEA/αα)携带者,同时男方为罗氏易位患者45,XY,rob(13∶14)(p10；p10),到本中心要求行植入前遗传学诊断(PGD).第一周期于第三天行卵裂球活检采用FISH方法进行罗氏易位诊断,第五天采用囊胚活检采用荧光PCR法进行α-地中海贫血诊断,移植三个胚胎后未孕.之后,我们采用多重置换扩增对单细胞进行全基因组扩增,其产物分别采用荧光差距PCR进行α-地中海贫血诊断；11个分别位于13号和14号染色体的多态性位点进行罗氏易位的诊断.该方法采用20个单淋巴细胞进行评估后成功应用于该对夫妇.结果 在20个单淋巴的预实验中,采用荧光差距PCR进行αt-地中海贫血的PCR扩增效率为100％,等位基因脱扣率(ADO)为10％(2/20)；对于诊断罗氏易位的11个多态性位点,PCR扩增效率为100％(220/220,等位基因脱扣率为11.6％(22/190).在临床PGD过程中,共有13个胚胎进行了第三天卵裂球活检,13个单卵裂球均MDA成功,12个单卵裂球获得α-地中海贫血诊断,诊断效率为92.3％(12/13)；而罗氏易位诊断的PCR扩增效率为100％(117/117),ADO为15.1％(13/86),三个胚胎被诊断为基因表型正常,移植了两个胚胎,可惜未获得妊娠.结论 采用MDA对单细胞进行全基因组的扩增可以产生足够的DNA模板同时进行两种或以上基因状态的检测,避免了两次活检对胚胎发育能力和种植潜能的损害.采用多态性位点的方法可以有效地、可靠地进行染色体易位的诊断.
其他文献
目的 探讨罗格列酮对PCOS大鼠TGF-β1/CTGF表达的干预作用.方法 雌性SD大鼠60只随机分为对照组、模型组和治疗组.模型组和治疗组大鼠在22日龄采用皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)的方法建立PCOS动物模型,治疗组从注射雄激素起子罗格列酮3 mg/kg/d灌胃.于第20天将大鼠处死,HE染色光镜下观察大鼠卵巢的病理结构；透射电镜观察细胞超微结构；微粒子酶免分析法测定血清激素水平的变化；大鼠
目的 了解药物干预对产前雄激素化雌性大鼠卵巢局部胰岛素信号通路Akt磷酸化及GLUT4转位的影响,以及药物干预后产前雄激素化雌性大鼠妊娠情况,探讨产前雄激素化雌性大鼠卵巢局部胰岛素信号通路异常机制,为PCOS不孕患者药物治疗提供理论依据.方法 选取孕晚期(孕16～19天)的雌性(Sprague-Dawley,SD)大鼠,实验组皮下注射双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT),对照
目的 本研究使用HPLC检测人早期胚胎解冻后和人早期新鲜胚胎培养后的氨基酸代谢水平,比较人早期胚胎解冻后与新鲜胚胎培养后的氨基酸代谢,旨在研究人早期胚胎解冻后的氨基酸代谢规律,为确定冻融胚胎解冻后的适宜移植时机提供依据。方法 选择2010年9月—-2011年4月接受体外受精-胚胎移植治疗的患者取卵后第3天6～10细胞的废弃胚胎,20 μl囊胚培养液(Quinns)微滴中单独培养2h后行玻璃化冷冻保
目的 探讨衣原体IgG抗体(CT-IgG)、C反应蛋白(CRP)和衣原体热休克蛋白60的IgG抗体(C-HSP60 IgG)与输卵管性不孕症和衣原体(CT)感染的关系,探求更为准确的输卵管性不孕的初筛指标及其组合.方法 选择经腹腔镜确诊的43例输卵管性不孕症患者,48例非输卵管性不孕症患者进行CT-IgG、CRP和C-HSP60 IgG检测,并对实验结果进行单个指标、两两联合和三者联合共7种筛查方
目的 探讨MTHFR C677T和MSA2756G基因多态性与我国男性不育的相关性.方法 选取少、弱、畸精症男性不育患者75例,有正常孕育史和精液质量正常的男性72例,分析MTHFR C677T及MS A2756G基因多态性,同时检测血Hcy水平.结果 精液异常组中MTHFR基因C677T多态性CT型、TT型及CT+TT型的分布频率均高于对照组中相应基因型的分布频率(P＜0.05),T等位基因在精
目的 自然流产(SA)是常见的妊娠并发症，其中连续两次及两次以上的流产称反复自然流产(RSA)，对原因不明的RSA(URSA)目前主要采取主动免疫治疗，闭抗体作为评价URSA患者免疫状态及免疫治疗疗效的唯一指标存在一定局限性.本研究通过检测外周血及子宫蜕膜中树突状细胞(DC)亚群，比较DC亚群在正常早孕及早期自然流产患者中的变化，探讨DC亚群与早期自然流产及URSA的相关性.为判断URSA患者免疫
背景 始基卵泡离开卵泡静息池,启动发育,经历从始基卵泡到初级卵泡的转化,这是卵泡发育中的重要过程,对卵巢功能储备与正常生育力的维持都至关重要.目的 观察研究神经信号调节在卵巢局部的功能活动与早期卵泡生长发育的关系,初步探讨神经递质血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)在参与始基卵泡生长发育启动的调控中的作用.方法 本研究从新生4天大鼠完整卵巢的体外培养体
目的 采用焦磷酸测序技术(Pyrosequencing),对ART妊娠早孕绒毛及停育绒毛中印记基因SNRPN的甲基化状态进行定量分析,以自然受孕早孕绒毛及停育绒毛为对照,探讨辅助生殖技术对印记基因SNRPN甲基化状态的影响,及印记基因SNRPN甲基化状态与早期妊娠胚胎发育的关系.方法 2008年5月至2011年4月于南方医院妇产科门诊收集ART自然停育绒毛31例；自然受孕早期停育绒毛33例；自然受
目的 研究神经生长因子(NGF)对人原始卵泡向初级卵泡转化、卵泡存活的作用.方法 将21例人卵巢皮质切成薄片分成5组：未培养组(Ⅰ组)、NGF组(Ⅱ组)、基础培养组(Ⅲ组)、抗NGF组(Ⅳ组)及同型抗体对照组(V组),培养结束后行组织学检查,免疫组化,TUNEL分析.结果 Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅳ组平均有33.83％±31.73％、53.51％±39.41％、39.30±31.73％的卵泡处于原始阶段,显著
目的 杜氏肌营养不良症(简称DMD)是一种以X连锁隐性遗传为主要遗传方式的进行性肌无力利肌萎缩疾病,目前干细胞治疗是唯一有效的治疗方法.本文探讨了采用多重置换扩增结合短串联重复序列多态性同时进行进行性肌营养不良的基因诊断和HLA配型的植入前遗传学诊断(PGD)方法.方法 采用MDA进行全基因组的扩增,然后采用单重荧光PCR分别进行特异性扩增缺失的DMD外显子和10个位于DMD基因内部的短串联重复序