【摘 要】
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采用正向硅胶柱色谱和半制备高效液相色谱分离方法,对南海海洋放线菌M.thermotolerans SCSI0 00652的60 L发酵罐粗提物进行了研究,分离到一个异咯嗪类化合物,经MS、1H和13C NMR波谱分析鉴定为7,8---甲基-10(1-D-核糖醇基)-异咯嗪,即核黄素,为首次从深海放线菌中分离.为阐明放线菌来源的核黄素的生物合成机制,通过生物信息学分析、基因组挖掘等技术寻找到包含其生
【机 构】
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中国科学院南海海洋研究所,中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室,广州,510301;中国科学院研究生院,北京,100049
【出 处】
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2013年中国科学院大学海洋科学学术论坛
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采用正向硅胶柱色谱和半制备高效液相色谱分离方法,对南海海洋放线菌M.thermotolerans SCSI0 00652的60 L发酵罐粗提物进行了研究,分离到一个异咯嗪类化合物,经MS、1H和13C NMR波谱分析鉴定为7,8---甲基-10(1-D-核糖醇基)-异咯嗪,即核黄素,为首次从深海放线菌中分离.为阐明放线菌来源的核黄素的生物合成机制,通过生物信息学分析、基因组挖掘等技术寻找到包含其生物合成基因簇的scaffold9、86和171,主要包括四个基因,依次为rfnA,编码GTP环水解酶/3,4二羟基-2-丁酮-4-磷酸合成酶；rfnG,编码嘧啶脱氨/还原酶；rfnH,编码二氧四氢碟啶合成酶(核黄素合成酶β亚基)；rfnB,编码核黄素合成酶α亚基.分别将这个四个基因克隆至His·Tag融合表达载体,经转化诱导以及SDS-PAGE分析发现目标蛋白均可溶性表达.利用Ni-NTA亲和层析法得到纯化的酶RfnA和RfnG,体外生化反应证实RfnA可以催化GTP生成2,5-二氨基-6-核糖氨基-4(3H)-嘧啶酮-5-磷酸(DARPP),这为其他3个酶反应提供了物质条件,也为体外酶促全合成核黄素奠定了基础.
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