【摘 要】
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目的 检测人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)伤口愈合相关蛋白白细胞介素6,8；转化因子1,β的表达水平.方法 无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液；取4-6代细胞用免疫细胞化学法和流式细胞术检测细胞表面抗原；用骨软骨脂肪表皮诱导分化培养基进行诱导分化.EGF100ng/ml作用hAMSC,分别提取hAMSC和EGF作用hA
【机 构】
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教育部医学细胞生物学重点实验室,卫生部细胞生物学重点实验室,中国医科大学干细胞与再生医学研究室,辽宁沈阳,110001
【出 处】
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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会
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目的 检测人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)伤口愈合相关蛋白白细胞介素6,8；转化因子1,β的表达水平.方法 无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液；取4-6代细胞用免疫细胞化学法和流式细胞术检测细胞表面抗原；用骨软骨脂肪表皮诱导分化培养基进行诱导分化.EGF100ng/ml作用hAMSC,分别提取hAMSC和EGF作用hAMSC总RNA,进行RNA-Seq分析.用qRT-PCR检测验证.结果 培养的人羊膜间充质干细胞呈梭形,旋涡样生长.通过流式细胞术检测HAMSCs高表达间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD44,CD90,CD105；免疫细胞化学法检测HAMSCs高表达间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD90,CD73,CD44.HAMSCs在骨,软骨,脂肪,表皮诱导分化培养基中可向成骨细胞、软骨和脂肪细胞及表皮细胞分化.Seq-RNA表达谱测序涉及创伤修复12个相关的表达基因,其中,上调基因9个(BMP2、CXCL3、IL1β、IL8、PLAT、PLAU、CCL2、CCL7、DCBLD2)；下调基因3个(C3、NGF、OLR1).并经qRT-PCR检测验证得到证实.结论 人羊膜间充质干细胞具有多向分化的潜能和干细胞的生物学特性,并能在一定诱导条件下分化为表皮细胞；表达伤口愈合相关蛋白BMP2、CXCL3、IL1β、IL8、PLAT、PLAU、CCL2、CCL7、DCBLD2.这一结果支持了人羊膜间充质干细胞在创伤修复中的应用.
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