【摘 要】
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目的：探索磷酸激酶C(PKC)在酒精撤退引起的小鼠海马神经元γ-氨基丁酸A型(GABAA)受体对酒精敏感性下降的作用机制,并探讨其对GABAA受体亚基转运的可能调控方式。方法：在体外原代培养14-15天(DIV14-15)的小鼠海马神经元中建立单次酒精暴露\撤退的细胞模型,采用全细胞膜片钳技术检测酒精撤退1或24小时后海马神经元GABAA受体介导的微小抑制性突触后电流(mIPSCs)和紧张性抑制电
【机 构】
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温州医科大学附属第一医院麻醉科 温州325000 浙江大学神经研究所
【出 处】
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中国中西医结合麻醉学会年会暨第二届全国中西医结合麻醉学术研讨会
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目的：探索磷酸激酶C(PKC)在酒精撤退引起的小鼠海马神经元γ-氨基丁酸A型(GABAA)受体对酒精敏感性下降的作用机制,并探讨其对GABAA受体亚基转运的可能调控方式。方法：在体外原代培养14-15天(DIV14-15)的小鼠海马神经元中建立单次酒精暴露\撤退的细胞模型,采用全细胞膜片钳技术检测酒精撤退1或24小时后海马神经元GABAA受体介导的微小抑制性突触后电流(mIPSCs)和紧张性抑制电流(Itonic)的变化情况,由此判断突触后和突触外GABAA受体功能的变化情况。再分别给予PKC抑制剂(chelerythrine)或激活剂(PDBu)干预神经元,检测单次酒精暴露\撤退引起的GABAA受体功能变化与PKC的关系。此外,利用表面生物素化标记和Western blot技术检测PKC激活与抑制在单次酒精暴露\撤退1小时后,对GABAA受体α4亚基的内化情况的调节作用,并在单次酒精暴露\撤退15分钟后检测不同脑区GABAA受体亚基α 4、pβ 3和δ内化情况。结果：1)酒精暴露/撤退后1小时急性酒精作用,Itonic增强率明显抑制,酒精暴露/撤退后24小时后急性酒精作用,mIPSCs增强而Ironic增强率明显抑制,PKC抑制剂chelerythrine可以减弱酒精的mIPSCs和Itonic调节作用,激动剂PDBu则增强酒精的作用；2)酒精暴露/撤退可以引起GABAA受体α4亚基内化的增加,PKC抑制剂chelerythrine可以抑制α4亚基内化；3)酒精暴露/撤退15分钟后,海马DG和CA1区GABAA受体亚基α4、pβ 3和δ内化增加。结论：小鼠海马神经元(DIV14-15)酒精暴露/撤退模型主要通过PKC磷酸化途径,影响GABAA受体亚基的磷酸化和内化过程,从而影响突触后和突触外GABAA受体功能。
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