【摘 要】
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目的 评价siRNA技术诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默模型的可行性.方法 通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1 a siRNA-FAM,使用Lipofectamine
【机 构】
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安徽医科大学药学院,安徽天然药物活性研究省级实验室,安徽省天然药物活性成分工程技术研究中心, 国家中医药管理局中医药科研三级实验室“中药药理实验室”,安徽合肥230032
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目的 评价siRNA技术诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默模型的可行性.方法 通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1 a siRNA-FAM,使用Lipofectamine 2000转染试剂盒将ASIC1 a siRNA转染入关节软骨细胞,采用荧光显微镜,流式细胞术,实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及Western Blot法检测ASIC1a mRNA和蛋白表达抑制的效果.结果 ASIC1 a siRNA能顺利转入软骨细胞,q-RT-PCR检测软骨细胞中ASIC1a mRNA的表达量,实验组与对照组差异具有显著性(P ＜0.01)；Western Blot结果显示转染特异性siRNA后ASIC1a蛋白表达受到抑制,最大抑制率为96.4％,远高于对照组(P＜0.01).结论 siRNA介导的佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默模型是研究酸敏感离子通道对软骨细胞代谢影响的可靠模型.
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