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目的 构建葡萄球菌肠毒素A (staphylococcal enterotoxin A,SEA)与锚定蛋白GPI的真核共表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI,转染喉癌Hep-2细胞,制备exosomes,检测SEA在exosomes中的表达.方法 利用NOT I双酶切法切断原核生物质粒pGSI-SEA-GPI粘性末端(NOT I酶切位点),琼脂糖电泳法分离目的基因-SEA-GPI-,普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂提取-SEA-GPI-,利用T4连接酶连接真核表达质粒pmiR-RB-REPORT与-SEA-GPI-,构建真核共表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI.脂质体法将pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI转染喉癌Hep-2细胞,提取喉癌细胞中的RNA,荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测目的基因-SEA-GPI-在喉癌细胞的转录情况.采用exosomes提取试剂盒提取喉癌细胞分泌的exosomes,Western blot测定SEA在exosomes中的表达.结果 构建的pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI通过琼脂糖凝胶电泳法鉴定基因分子量,表明构建成功.真核共表达质粒转染喉癌细胞,qRT-PCR测出其在喉癌细胞中有效转录,Western blot测出exosomes中有SEA表达,表明喉癌细胞的exosomes含有SEA,SEA通过GPI结构锚定于exosomes膜上.结论 成功地构建了真核共表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI,将其转染喉癌Hep-2细胞,制备exosomes,SEA通过GPI结构锚定在exosomes上,为研究增强肿瘤局部免疫效应,及制备SEA-GPI锚定蛋白的SEA-eoxsomes瘤苗抗喉癌,作出了探索.