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目前,在鱼类生殖轴(下丘脑-垂体-性腺)上检测到高表达的雌激素受体信号,表明了雌激素受体介导的雌激素效应调控着整个生殖活动的上下游.但是对于调控GnIH神经元的潜在机制知道的很少.在本研究中,克隆得到斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)GnIH基因的5侧翼序列,其中包括转录起始位点上游片段1573bp及第一外显子片段25bp.并通过在线软件分析GnIH基因启动子上的转录因子结合位点.斜带石斑鱼的GnIH启动子序列拥有2个1/2雌激素反应元件(estrogen responsive element (ERE) half-sites,1/2ERE),2个cAMP反应元件(cAMP-responsive element,CRE),1个雌激素受体特异蛋白-1结合位点(ER/specificity protein-1 binding site,Spl),1个与ERE元件共同序列(5GGTCAnnnTCACC3)相差仅两个碱基的ERE-like元件(ERE-like sequence),序列为5CGTCAGGTGACG3.用构建好的斜带石斑鱼GnIH基因启动子的重组质粒GnIH-1573,本文研究了斜带石斑鱼GnIH的启动子在HEK 293T细胞系中的活性.将GnIH启动子重组载体和斜带石斑鱼pcDNA-ERαt或pcDNA-ERβ2共转染至HEK 293T细胞系中,结果表明,10-7M的雌激素处理共转染pcDNA-ERβ2能够使得GnIH启动子活性显著降低,而10-7M的雌激素处理共转染pcDNA-ERα的细胞不能影响GnIH启动子的活性.表明,当ERα存在与否时,E2均不能够激活GnIH启动子的活性.当ERβ2存在时,E2能够激活GnIH启动子的活性,而当缺失ERβ2时,则刺激作用消失.进一步了解雌激素对于GnIH基因启动子活性的调节作用,我们用不同浓度的雌激素(10-10 M-10-7M)进行处理.结果表明,不同浓度雌激素处理共转染pcDNA-ERα的细胞不能影响GnIH启动子的活性.不同浓度雌激素处理共转染pcDNA-ERβ2的细胞均能够使得GnIH启动子活性显著降低,且浓度越大,GnIH启动子活性降低的幅度越大.表明,雌激素可以通过ERβ2介导抑制斜带石斑鱼GnIH基因启动子活性.鉴定启动子上哪些区域参与了由ERβ2介导的雌激素对斜带石斑鱼GnIH基因的转录调节,我们构建了GnIH基因5端长度逐渐缺失的启动子报告基因重组载体,对GnIH基因启动子的结构进行分析.研究结果显示,随着启动子片段的不断删除,GnIH基因启动子的基本活性并无显著性变化.当GnIH基因启动子片段递减至起始位点5上游-235bp时雌激素对启动子的活性仍有显著性降低趋势,但是当GnIH基因启动子片段递减至起始位点5上游-93bp时,雌激素对启动子活性没有抑制作用.在5上游235bp到-93bp间,必定存在与之相关的雌激素应答元件.在5上游-235bp到-93bp间,存在着一个CRE元件和一个ERE-like元件.进一步验证ERE-like元件是否为雌激素作用于GnIH的位点,我们对-ll2bp到-101bp的ERE-like元件运用融合PCR技术进行突变,并且构建了突变载体.共转染结果发现,突变使由E2对GnIH启动子活性抑制作用消失.结果表明,E2是通过与ERE-like元件结合实现对GnIH启动子活性的调节.