【摘 要】
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目的:探讨分子信标探针转录介导的扩增技术(transcription mediatedamplification,TMA)与聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测丙型肝炎核糖核酸(Hepatitis C virus RNA,HCV RNA)灵敏性的差异,同时评价分子信标探针TMA体系试剂在不同储存温度条件下的稳定性.方法:使用分子信标探针,分别采用TMA检测
【机 构】
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中南大学湘雅医院感染病科 410008
【出 处】
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第三届全国病毒性肝炎慢性化重症化基础与临床研究进展学术会议
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目的:探讨分子信标探针转录介导的扩增技术(transcription mediatedamplification,TMA)与聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测丙型肝炎核糖核酸(Hepatitis C virus RNA,HCV RNA)灵敏性的差异,同时评价分子信标探针TMA体系试剂在不同储存温度条件下的稳定性.方法:使用分子信标探针,分别采用TMA检测技术及PCR方法同时检测70份临床HCV抗体阳性患者的血清标本,比较两种方法在结果灵敏性方面的差异,对结果不符合的标本,采用增加血清提取量扩大模板方法进行同一方法的重测;同时以一组10倍梯度稀释的HCV体外转录RNA为样本,比较使用新配制的以及储存于不同温度下的分子信标TMA体系试剂的检测结果,评价分子信标探针TMA试剂的稳定性.结果:1.70份临床HCV抗体阳性患者的血清标本,分子信标TMA检出HCV RNA阳性标本数为34例,PCR检出HCV RNA阳性标本数为32例,两种检测方法均为阳性的标本,其HCV RNA滴度均在1000copies/ml以上,两例PCR阴性标本,TMA检测出的HCV RNA滴度均在300copies/ml以下,在增加血清提取量扩大模板后再次采用PCR重测HCV RNA,有1例标本为阳性.两种检测方法对于HCV RNA滴度在1000copies/ml以上的样本阳性检出率差异无统计学意义(P＞0.05).2.分子信标TMA体系试剂在20℃T保存24小时,样本的扩增曲线不光滑,荧光值dR高低不一;在4℃下储存1-6天,样本线性相关性均在0.99以上,储存第7天,样本线性相关性降低至0.977;6个月内,-20℃下储存的分子信标探针TMA试剂检测扩增曲线基本一致,每次线性相关性及样本曲线较好.结论:1.对于HCV RNA滴度在1000copies/ml的标本,分子信标TMA与PCR检测HCV RNA的结果具有较好的可比性,但前者在低滴度HCV RNA检测方面更具优势.2.2℃下保存分子信标探针TMA体系不稳定,24小时结果有明显的影响;4℃下分子信标探针TMA体系保存6天,结果都较稳定的;-20℃下保存,试剂的稳定性较好.
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