【摘 要】
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探讨通过IL-10重组慢病毒载体转染小鼠未成熟树突状细胞(iDC),构建高分泌IL-10的耐受性树突状细胞的可行性。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)联合诱
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探讨通过IL-10重组慢病毒载体转染小鼠未成熟树突状细胞(iDC),构建高分泌IL-10的耐受性树突状细胞的可行性。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)联合诱导并经CD11c免疫磁珠分选获得小鼠骨髓iDCs,倒置显微镜下观察,流式细胞术分析细胞表面分子;IL-10重组慢病毒载体转染小鼠iDCs,荧光显微镜下观察GFP表达,ELISA法测定转染细胞的IL-10表达水平,并行混合淋巴细胞反应,观察其诱导T淋巴细胞增殖的情况,流式细胞术检测调节性T细胞。结果:获得大量高纯度未成熟DCs,随培养时间延长表现出典型的树突状形态,流式细胞术分析显示iDCs表面MHCⅡ、CD80、CD86表达水平均显著低于mDCs;未成熟DCs经IL-10慢病毒转染后,荧光显微镜下观察GFP蛋白高度表达,ELISA检测IL-10表达水平明显高于对照组(P<0.05),且IL-10转染iDCs体外刺激T淋巴细胞增殖的能力弱于未转染iDCs,但调节性T细胞比例高于后者。IL-10基因通过慢病毒载体介导,成功整合到iDCs基因内,使其高表达IL-10,基因修饰后的iDCs的致免疫耐受作用得到了增强。
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