【摘 要】
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目的:利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体.方法:首先从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用OligodT为逆转录引物逆转录合成cDNA第一链
【机 构】
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武汉生物制品研究所免疫研究室,卫生部单克隆抗体中试实验室(湖北武汉)
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目的:利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体.方法:首先从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA,采用OligodT为逆转录引物逆转录合成cDNA第一链,然后分别采用针对V<,L>和V<,H>框架区的PCR引物扩增出V<,H>(重链可变区)和V<,L>(轻链可变区)DNA片段,利用事先合成的存在于V<,L>下游引物和V<,H>上游引物的部分人工连接子重叠互补序列,将V<,L>和V<,H>的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE),形成单链抗体基因.最后将此基因重组进pBAD/gⅢ/C表达载体中,经L-arabinose(左旋阿拉伯糖)诱导表达,并初步鉴定.结果:构建出一700bp左右的单链基因,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物一27 000Da左右的蛋白分子.结论:经因特网查询表明,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区ⅠA亚组;轻链属于小鼠κ轻链可变区Ⅱ亚组,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性.这为抗CD71单链抗体最终临床应用打下了基础.
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