论文部分内容阅读
牛肝菌属(Boletus)隶属于担子菌门(Basidiomycota)%伞菌纲(Agaricomycetes)、牛肝菌目(Boletales)、牛肝菌科(Boletaceae),是该科中最大的一个属。其广布于全球温带、亚热带和热带地区。牛肝菌绝大多数与高等植物根系共生形成外生菌根,因其子实体味道鲜美、营养丰富,药用价值高,是一种深受人们喜爱的著名食用真菌。牛肝菌除个别腐生种能在实验条件下驯化栽培外,绝大部份种类尚不能通过人工栽培形成子实体。目前市场上的产品完全依赖于野外采收,但随着生态环境的破坏以及野生资源的过度开发,己不能满足日益增长的市场需求,难以可持续性利用。砖红绒盖牛肝菌(Xerocomus spadiceus)在牛肝菌属中具有典型代表性,且在云南分布广泛。本文以砖红绒盖牛肝菌为研究对象,在建立纯培养的基础上创新性地成功诱导出了试管子实体原基。通过Illumina高通量测序平台获取原基有无条件下的转录组数据,基于转录组数据,通过差异基因表达分析确定可能参与子实体形成的候选基因,揭示牛肝菌试管子实体原基发生的分子机制。这为今后利用基因工程调控子实体发育,为牛肝菌及其他珍稀野生食用菌根真菌的规模化人工培养提供了一定的理论依据。主要研究内容及结果如下:1.利用改良PDA培养基,成功诱导出了砖红绒盖牛肝菌菌丝体及试管子实体原基,并利用ITS分子标记,对它们进行了鉴定,结果表明菌丝体、原基皆来源于相应的子实体。2.采用OMEGA Fungal RNA Kit R6840-01试剂盒提取子实体、菌丝体、原基的RNA,并对其进行转录组测序分析。结果表明,6个样品,共获得48.08G的原始数据;Q30碱基百分比均大于85%;利用软件拼接后获得158488条Transcript和49055条Unigene;将这些Unigene与公共数据库NR、Swiss-Prot、GO、COG、 KOG、KEGG中的序列进行比对,获得注释的Unigene 34081个。3.差异表达基因的筛选表明,子实体原基有无条件下的差异基因共有689个,基中上调基因444个,下调基因245个。差异基因的GO分类表明,关联细胞组分的差异基因主要涉及细胞膜、胞外区域;分子功能的主要涉及催化、转运、结构分子、电子载体活性等;生物学过程中节律进程占有较高比率。差异基因的COG功能分类表明,一般功能基因居多;其次是氨基酸转运和代谢,碳水化合物转运和代谢,复制、重组和损伤修复。差异基因的KEGG代谢通路分类表明,129个差异基因,主要分布于淀粉和蔗糖代谢(14)、氧化磷酸化(10)、糖酵解/糖异生(7)、内质网蛋白质加工(7)、拼接体(7)等代谢途径中。