【摘 要】
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成熟精子和卵子的整个基因组几乎全部处于转录沉默状态,但其细胞内保存有大量RNA,其中部分RNA可能对受精卵的分裂及后续发育有重要调控作用.已有研究显示干扰小鼠受精卵雄原核中来源于Y染色体的Dby基因的mRNA可显著抑制雄性胚胎的体外发育效率,但对雌性胚胎的体外发育无显著影响.为了更深入研究Dby基因对小鼠胚胎体内发育及出生性别比例的影响,本研究针对小鼠的Dby基因设计4条siRNA (small
【机 构】
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华南农业大学动物科学学院,国家生猪种业工程技术研究中心
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成熟精子和卵子的整个基因组几乎全部处于转录沉默状态,但其细胞内保存有大量RNA,其中部分RNA可能对受精卵的分裂及后续发育有重要调控作用.已有研究显示干扰小鼠受精卵雄原核中来源于Y染色体的Dby基因的mRNA可显著抑制雄性胚胎的体外发育效率,但对雌性胚胎的体外发育无显著影响.为了更深入研究Dby基因对小鼠胚胎体内发育及出生性别比例的影响,本研究针对小鼠的Dby基因设计4条siRNA (small interfering RNA),分别构建4个能够在真核细胞中表达相应短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒表达载体pGLVH 1-shRNA-GFP (D1,D2,D3,D4),用慢病毒包装后转染小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),96h后用荧光定量PCR检测不同载体对Dby mRNA的干扰效果.结果显示编号为D1的载体干扰效果最好,其对MC3T3-E1细胞中Dby mRNA的干扰效率能够达到86.0％.将化学合成的D1载体所对应的siRNA显微注射到143个小鼠受精卵的雄原核中,并将注射后的受精卵移植入9只假孕母鼠的双侧输卵管伞部.目前正在等待小鼠出生并进行性别鉴定,统计性别比例.
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