【摘 要】
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布鲁氏菌病是全球重要的多器官人畜共患传染病之一,严重危害人和动物的健康.布鲁氏菌在细胞内可以利用T4SS 分泌多种效应蛋白进入宿主细胞,干扰宿主细胞的功能.为了研究布鲁氏菌效应蛋白BspF 对宿主细胞蛋白质乙酰化修饰的影响及其所发挥的功能.本研究以布鲁氏菌16M 标准株的DNA 为模板扩增BspF 目的 基因构建表达载体.将构建好的表达载体和空载体转染于HEK-293T 细胞中,并于转染后30h
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布鲁氏菌病是全球重要的多器官人畜共患传染病之一,严重危害人和动物的健康.布鲁氏菌在细胞内可以利用T4SS 分泌多种效应蛋白进入宿主细胞,干扰宿主细胞的功能.为了研究布鲁氏菌效应蛋白BspF 对宿主细胞蛋白质乙酰化修饰的影响及其所发挥的功能.本研究以布鲁氏菌16M 标准株的DNA 为模板扩增BspF 目的 基因构建表达载体.将构建好的表达载体和空载体转染于HEK-293T 细胞中,并于转染后30h 收集细胞.本研究通过非标定量结合液相色谱-质谱串联(LC-MS/MS),对BspF 作用于宿主造成细胞乙酰化修饰的变化情况进行检测与分析.共鉴定出28 个蛋白的34 个乙酰化位点修饰显著上调,23 个蛋白的23 个乙酰化位点修饰显著下调.通过生物信息学分析技术,对这些蛋白从亚细胞定位、生物学作用、KEGG 通路等进行分析.亚细胞结构定位分布情况结果显示,乙酰化位点显著上调的蛋白主要分布在细胞核和细胞质,显著下调的蛋白主要分布在细胞质.此外,分析结果显示乙酰化修饰显著差异蛋白与新陈代谢、调节细胞内物质分泌和转运、免疫系统功能作用、氨基酸生物合成和代谢过程等多种生物进程相关.发生乙酰化修饰的蛋白基序有3 种,它们分别是DKup、KupXXXKup 和GKup.该研究不仅拓展了BspF引起宿主细胞蛋白发生乙酰化修饰所发挥的功能作用,而且还为胞内寄生菌在宿主细胞内生存和复制机制的研究提供了资源.
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