论文部分内容阅读
目的:抗N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体脑炎是近几年发现且越来越受关注的边缘性脑炎的一种,临床表现多样,脑脊液和/或血清中检出抗NMDA受体抗体具有诊断价值。本研究旨在探讨抗NMDA受体抗体在海马神经元上的作用位点,利用HEK293细胞转染表达NMDA受体亚基的方法探寻抗NMDA受体抗体的临床检测方法。方法:用实验组(临床确诊的抗NMDA受体脑炎患者)与对照组(健康体检者或非感染免疫相关疾病患者)的脑脊液分别孵育大鼠海马神经元,采用单标记或双标记的间接免疫荧光法,利用激光共聚焦显微镜观察抗NMDA受体抗体在鼠海马神经元上的作用位点;将SD大鼠腹腔注射麻醉后,进行常规灌注固定,断头取脑,蔗糖沉淀,用冰冻切片机做连续冠状切片,用实验组和对照组的脑脊液分别孵育含海马结构的鼠脑组织切片,观察实验组抗体作用结果;将表达NR1和NR2(A、B)的质粒以等分子浓度在合适条件下共转染至HEK293细胞,采用免疫荧光及Western Blotting的方法验证转染是否成功,然后用实验组和对照组的血清和/或脑脊液孵育表达NR1/NR2功能二聚体的HEK293细胞,采用间接免疫荧光法观察是否存在抗原抗体反应,从而判断血清和/或脑脊液中是否存在抗NMDA受体抗体;将该检测方法与国外已有的抗体检测方法对照,分析评估该检测方法的特异性和灵敏度。结果:抗NMDA受体脑炎患者的抗NMDA受体抗体主要作用于海马的神经纤维网,特别是海马神经元胞膜。HEK293细胞表达NMDA受体亚基的检测方法特异性和灵敏度均较高。结论:抗NMDA受体脑炎患者血清和/或脑脊液中检测到抗NMDA受体抗体对其诊断至关重要。NR1/NR2功能二聚体的表达是抗NMDA受体抗体结合的基础。利用间接免疫荧光法观察患者血清和/或脑脊液是否与转染后的HEK293反应,是抗NMDA受体抗体临床检测的一种重要方法。