【摘 要】
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在多黏类芽孢杆菌WY110产生的对稻瘟病菌具拮抗活性的抗菌蛋白编码基因(licP)克隆测序的基础上,为构建融合蛋白表达载体和获得与天然蛋白质序列完全一致的目的蛋白,以含有lic
【机 构】
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河北大学生命科学学院,保定,071002中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京,100101中国科学院过程工程研究所,北京,100080首都师范大学生命科学学院,北京,100037
【出 处】
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第一届全国农业生物资源与环境调控学术研讨会
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在多黏类芽孢杆菌WY110产生的对稻瘟病菌具拮抗活性的抗菌蛋白编码基因(licP)克隆测序的基础上,为构建融合蛋白表达载体和获得与天然蛋白质序列完全一致的目的蛋白,以含有licP基因的重组质粒DNA为模板,设计引物时加入两端酶切位点及肠激酶裂解位点,通过PCR扩增引入目的基因中,测序结果表明接头和读框正确.对目的基因进行双酶切后与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX-3X定向连接,转化大肠杆菌JM109,成功构建了重组表达载体pGLE1.经IPTG诱导表达,超声破碎菌体,收获细胞总裂解物;SDS-PAGE分析表明,融合蛋白获得高效表达,分子量约为50 kD,表达量约占菌体总蛋白的30％.采用谷胱甘肽亲和层析柱纯化GST融合蛋白,经肠激酶特异性裂解释放出目的蛋白.生物活性测定结果表明,目的蛋白具有β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性并对稻瘟病菌具有明显抑菌活性.
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