【摘 要】
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干细胞对肿瘤的发生,转移和治疗均有重要作用。在前期的研究中,我们将食管癌细胞S4(食管癌原代培养细胞),KYSE150和EC9706细胞分别用流式仪分离出侧群SP细胞(具有食管癌干细
【机 构】
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郑州大学第一附属医院; 中国医学科学院肿瘤医院病因及癌变研究室;
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干细胞对肿瘤的发生,转移和治疗均有重要作用。在前期的研究中,我们将食管癌细胞S4(食管癌原代培养细胞),KYSE150和EC9706细胞分别用流式仪分离出侧群SP细胞(具有食管癌干细胞特性),并以表达谱芯片筛选到了食管癌干细胞中高表达的基因TM4SF1。我们用RT-PCR和Westem Blot验证了TM4SF1表达情况,与芯片筛选一致,TM4SF1在SP细胞较非侧群细胞(NSP)高表达。我们经TargetScan6.0软件预测发现TM4SF1的3’UTR在+157~+163bp处有一个microRNA-141(miR-141)的结合位点。因此预测miR-141可能通过TM4SF1的3’UTR来调控TM4SF1的表达。同时,我们用RT-PCR验证了miR-141在SP细胞较NSP低表达,与预测结果一致。我们通过慢病毒转染食管癌细胞系KYSE150得到了稳定高表达miR-141的细胞株Lenti.miR-141。通过Westem Blot验证,TM4SF1在Lenti.miR-141细胞株中表达明显下降;在KYSE150细胞中转染化学合成的miR-141后,也得到相似的结果。在双荧光素报告基因实验中,将构建的TM4SF1的3’UTR荧光报告质粒转染至Lenti.miR-141细胞株中后,荧光活性显著下降;而将构建的TM4SF1的3’UTR结合位点突变质粒转染后,荧光活性得到一定的恢复。以上实验验证了miR-141基因调控TM4SF1的表达,这一机制可能在食管癌干细胞中起到重要作用,这将为食管癌干细胞的治疗提供新的策略和理论依据。
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