ALK2对小鼠髁突软骨细胞增殖分化的影响

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目的:探讨激活素受体样激酶2(ALK2)对小鼠髁突软骨细胞增殖及成软骨向分化的作用。方法:采用酶消化法提取1月龄C57雄性小鼠髁突软骨细胞并观察其形态。通过免疫组化染色方法及微球培养(pellet培养)成软骨诱导对其进行鉴定。体外选用阳离子脂质体作为载体,采用si-RNA沉默小鼠髁突软骨细胞中Alk2基因的表达。流式细胞技术检测其转染效率,实时定量RT-PCR检测Alk2基因沉默效率。将实验分为2组(沉默组及非沉默组),通过MTT法检测小鼠髁突软骨细胞增殖。两组均利用成软骨诱导液及骨形成蛋白2(BMP2)进行成软骨诱导,通过实时定量RT-PCR方法检测软骨细胞标志基因Sox9,ColⅡ,ColⅩ和ColⅠ的表达。结果:倒置显微镜观察体外培养的小鼠髁突软骨细胞形态呈多边形较圆。免疫组化染色显示所分离的细胞COLⅠ强阳性,AGGRECAN弱阳性,COLⅡ弱阳性。Pellet培养后实时定量RT-PCR检测发现ColⅡ,ColⅩ和ColⅠ表达上调。证实所分离的细胞是髁突软骨细胞。流式细胞技术检测转染后6h转染效率达77%。实时定量RT-PCR结果显示转染后24h沉默效率达83%。MTT结果显示Alk2沉默后细胞数量增加,实时定量RT-PCR结果显示Alk2沉默后软骨细胞标志基因Sox9,ColⅡ,ColⅩ和ColⅠ表达下调,并有显著统计学意义。结论:ALK2能够抑制小鼠髁突软骨细胞的增殖,促进小鼠髁突软骨细胞的成软骨分化。
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