【摘 要】
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[目的]在课题组前期研究已证实黏菌素可诱导大鼠PC12细胞(交感神经细胞系)发生自噬和凋亡的基础上,进一步探讨p53蛋白对黏菌素诱导PC12细胞发生的自噬和凋亡是否存在调节作用及相关机制.[方法]将培养好的PC12细胞分为空白组、黏菌素组(125 μg·mL-1)、PFT-α组(p53抑制剂,20 nM)及黏菌素(125 μg.mL-1)与PFT-α(20 nM)联合用药组.各组细胞在培养箱内分别
【机 构】
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辽宁医学院畜牧兽医学院,锦州,辽宁,121001 东北农业大学动物医学学院,哈尔滨,黑龙江,150
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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[目的]在课题组前期研究已证实黏菌素可诱导大鼠PC12细胞(交感神经细胞系)发生自噬和凋亡的基础上,进一步探讨p53蛋白对黏菌素诱导PC12细胞发生的自噬和凋亡是否存在调节作用及相关机制.[方法]将培养好的PC12细胞分为空白组、黏菌素组(125 μg·mL-1)、PFT-α组(p53抑制剂,20 nM)及黏菌素(125 μg.mL-1)与PFT-α(20 nM)联合用药组.各组细胞在培养箱内分别与药物接触12h和24 h.运用透射电镜、LC3免疫荧光染色、Hoechst 33258荧光染色、real-time PCR和western blotting方法观察细胞自噬和凋亡并检测p53通路上关键因子的表达.[结果]125 μg·mL-1黏菌素可诱导PC12细胞发生自噬和凋亡,且可使细胞中LC3-Ⅱ、p53、DRAM(损伤相关自噬调节因子)、PUMA(p53上调促凋亡蛋白)、AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)和caspase-3的基因水平和蛋白表达量有所增加,使mTOR(雷帕霉素靶蛋白)的基因水平和蛋白表达量有所降低.重要的是黏菌素在12 h时主要诱发细胞自噬,并显著性增加胞核内p53的表达量；在24h时主要诱发细胞凋亡,并显著性增加胞浆中p53的表达量.PFT-α (20 nM)可明显抑制细胞内p53活性,且使细胞活性随其剂量增加而有所下降.在黏菌素与PFT-α联合作用时,PFT-α可抑制黏菌素诱导的细胞自噬并促进其诱导的细胞凋亡.[结论]黏菌素诱导的细胞自噬和凋亡与p53的调控网络有关,且其诱导细胞自噬或凋亡的趋势可能与p53在细胞内的定位调节有关.
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